[发明专利]一种组织匀浆法分离活细胞构建细胞库的方法

权利要求书

1.一种组织匀浆法分离胎儿附属物组织构建细胞(团)库的方法，其特征是由下述步骤组成：

(1)对胎儿附属物组织提供者进行ABO／Rh血型检测、HLA分型检测、微生物免疫检测、用含双抗的缓冲液去除残留血液；

(2)组织匀浆前处理：将清洗后的组织剪成小块，放入组织细胞处理装置样品室中，加入0.5-2倍质量的缓冲液或培养基，密封组织细胞处理装置；

(3)组织匀浆处理：运转组织细胞处理装置，在转速为1000-3500rpm，处理时间为1-15分钟的条件下，将组织切碎和匀浆，对组织进行细胞(团)的分离处理；

(4)组织过滤处理：将步骤(3)得到的匀浆液通过100-400目的滤网过滤：对于胎盘小叶和基蜕膜组织、胎盘底座组织，对滤网上残留的少许胎盘组织块进行研磨，收集滤液；对于脐带组织、胎盘羊膜组织，收集滤网上的细胞团。

(5)细胞(团)收集与清洗：对于细胞，用离心管收集步骤(4)得到的细胞悬液，以1400-1800rpm／分钟的速度离心5-15分钟，去上清并加入缓冲液重悬细胞；对于细胞团，用缓冲液清洗后直接收集细胞团。

(6)将步骤(5)分离的细胞(团)置液氮保存，按其ABO／Rh分型和HLA分型进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，即构建出细胞库。

2.如权利要求1所述的组织匀浆法分离胎儿附属物组织构建细胞(团)库的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中，胎儿附属物组织包括胎盘小叶和基蜕膜、胎盘底座、胎盘羊膜和脐带。

3.如权利要求1所述的组织匀浆法分离胎儿附属物组织构建细胞(团)库的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，所使用的组织细胞处理装置为组织匀浆处理器，优选发明人研制的组织细胞处理器PlacentaPro。

4.如权利要求1所述的组织匀浆法分离胎儿附属物组织构建细胞(团)库的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，组织细胞处理装置所处理的胎儿附属物组织样品的大小为5-300g，其中脐带组织为5-30g，胎盘小叶和基蜕膜组织为30-120g，胎盘底座组织为100-300g，胎盘羊膜组织为5-25g。

5.如权利要求1所述的组织匀浆法分离胎儿附属物组织构建细胞(团)库的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中，胎盘小叶和基蜕膜组织处理转速优选1000-2400rpm；脐带组织处理转速优选1500-3500rpm；胎盘底座组织处理转速优选1500-2500rpm；胎盘羊膜组织处理转速优选2000-3000rpm。

6.如权利要求1所述的组织匀浆法分离胎儿附属物组织构建细胞(团)库的方法，其特征在于，所述的步骤(4)中，过滤胎盘小叶和基蜕膜组织、胎盘底座组织时，优选200目的金属滤网；过滤脐带组织、胎盘羊膜组织时，优选400目的金属滤网。

7.如权利要求1所述的组织匀浆法分离胎儿附属物组织构建细胞(团)库的方法，其特征在于，所述的步骤(6)中，细胞库可以是脐带间充质干细胞库、胎盘造血干细胞库、胎盘亚全能细胞库、基蜕膜干细胞库和羊膜上皮细胞库。

8.如权利要求1所述的组织匀浆法分离胎儿附属物组织构建细胞(团)库的方法，其特征在于，所述的步骤(6)中，质量控制包括了细胞来源的调查；细胞污染的检测，如乙肝两对半、丙肝、艾滋、巨细胞病毒、EB病毒和梅毒；遗传病检测；HLA-ABC／DR配型检测；细胞活性的检测。