[发明专利]PCR直接测序法对汉坦病毒进行基因分型的引物及试剂盒和方法

权利要求书

1.一对引物，包括：

上游引物：ATTAGCCCWGTCATGAGTGT；

下游引物：CTTTGACTCYTTTGKYTCCA；

其中Y为C或T，W为A或T，K为G或T。

2.利用权利要求1所述引物对汉坦病毒进行基因分型的方法，包括：

（1）提取待测病毒样本的总RNA，逆转录获得cDNA；

（2）以所述cDNA为模板，利用权利要求1所述引物进行PCR扩增，并对扩增的目的片段进行测序；

（3）基于目的片段的序列信息并以已知基因型代表毒株的相应片段为参照构建系统发生树；

（4）根据系统发生树对待测病毒样本进行基因分型。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，采用双向测序法对扩增的目的片段进行测序，测序完成后进行序列拼接。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，利用邻位相连法构建系统发生树。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述已知基因型代表毒株包括株号为76-118、A16、C1-2、NC167、Z10、Gou3、K24-V2、L99、R22、SR11、160V、Dobrava、Cg-13891、Cg-Erft、K27、Vranica、AH1、C9717869、Of22819、Bayou、NMH10、NMR11、CC74和CC107的汉坦病毒。

6.一种用于汉坦病毒基因分型的试剂盒，包括PCR缓冲液、dNTP液、MgCl₂溶液、Taq酶、引物、阴性对照、阳性对照和去离子水，其特征在于，所述引物为权利要求1所述的引物。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，MgCl₂溶液的浓度为25mM，dNTP液的浓度为10mM。

8.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括核酸提取液和胶回收提取液。