[发明专利]抗肿瘤活性化合物的制备方法

权利要求书

1.一种式（Ⅰ）化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（a）将云南藤黄用甲醇、乙醇、丙酮或丁酮室温浸泡提取或加热回流提取，溶剂用量5～10倍，减压浓缩提取液至无有机溶剂味，得浸膏A；

（b）对浸膏A进行硅胶柱层析分离：硅胶用量为浸膏的10～20倍，规格为100～300目，用三氯甲烷溶剂进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩三氯甲烷洗脱液，得浸膏B；

（c）对浸膏B进行MCI柱或大孔树脂柱层析分离：以乙醇与水按90:10的体积比形成的混合溶液进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩洗脱液，得浸膏C；

（d）对浸膏C进行MPLC纯化：将含有目标化合物的流份经中压ODS柱层析纯化，以甲醇与水按85:15-100:0的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压，浓缩，干燥。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，它包括如下步骤：

（a）将云南藤黄用丙酮室温浸泡提取，丙酮体积为云南藤黄药材质量的5倍，每次浸泡48h，共浸泡提取3次，合并丙酮浸泡提取液，减压浓缩至无丙酮味，得浸膏A；

（b）对浸膏A进行硅胶柱层析分离：硅胶用量为浸膏的10倍，规格为200目，浸膏A用三氯甲烷进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩三氯甲烷洗脱液，得浸膏B；

（c）对浸膏B进行MCI柱层析分离：以乙醇与水按90:10的体积比形成的混合溶液进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩洗脱液，得浸膏C；

（d）对浸膏C进行MPLC纯化：将含有目标化合物的流份经中压ODS柱层析纯化，以甲醇与水按85:15-100:0的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，流速为20mL/min，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压，浓缩，干燥。

3.一种式（Ⅱ）化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（a）将云南藤黄用甲醇、乙醇、丙酮或丁酮室温浸泡提取或加热回流提取，溶剂用量5～10倍，减压浓缩提取液至无有机溶剂味，得浸膏A；

（b）对浸膏A进行硅胶柱层析分离：硅胶用量为浸膏的10～20倍，规格为100～300目，用三氯甲烷溶剂进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩三氯甲烷洗脱液，得浸膏B；

（c）对浸膏B进行MCI柱或大孔树脂柱层析分离：以乙醇与水按90:10的体积比形成的混合溶液进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩洗脱液，得浸膏C；

（d）对浸膏C进行MPLC纯化：将含有目标化合物的流份经中压ODS柱层析纯化，以甲醇与水按85:15-100:0的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩洗脱液，得浸膏D；

（e）对浸膏D进行HPLC纯化：将含有目标化合物的流份经ODS制备色谱柱纯化，洗脱液是以等比例的乙腈与甲醇形成的混合溶液再与0.1%甲酸水按85:15的体积比形成的混合溶液，流速为20mL/min，收集保留时间为20～30min的目标化合物流份，减压，浓缩，干燥。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，它包括如下步骤：

（a）将云南藤黄用丙酮室温浸泡提取，丙酮体积为云南藤黄药材质量的5倍，每次浸泡48h，共浸泡提取3次，合并丙酮浸泡提取液，减压浓缩至无丙酮味，得浸膏A；

（b）对浸膏A进行硅胶柱层析分离：硅胶用量为浸膏的10倍，规格为200目，浸膏A用三氯甲烷进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩三氯甲烷洗脱液，得浸膏B；

（c）对浸膏B进行MCI柱层析分离：以乙醇与水按90:10的体积比形成的混合溶液进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩洗脱液，得浸膏C；

（d）对浸膏C进行MPLC纯化：将含有目标化合物的流份经中压ODS柱层析纯化，以甲醇与水按85:15-100:0的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩洗脱液，得浸膏D；

（e）对浸膏D进行HPLC纯化：采用Waters2535或2545制备液相色谱仪，色谱柱为Waters Xbridge Prep C18OBD column(19×250mm，5μm)，洗脱液是以等比例的乙腈与甲醇形成的混合溶液再与0.1%甲酸水按85:15的体积比形成的混合溶液，流速为20mL/min，收集保留时间20min的目标化合物流份，减压，浓缩，干燥。