[发明专利]一种从防风草叶中提取防风草二内酯的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药提取分离技术领域，涉及一种从防风草叶中分离制备防风草二内酯的方法。

背景技术

防风草二内酯（Ovatodiolide），分子式为C20H24O4，分子量为328.41，结构式为

防风草二内酯来源于唇形科(Labiatae) 防风草Anisomeles indica (L.)O.Ktze.的叶。防风草二内酯具有细胞毒活性，对KB细胞的IC50为0.6μg/mL；具有降压作用，抑制离体蛙心的收缩和Ca²⁺流，引起狗短暂的降压作用，但不抑制血管紧张素转换酶(ACE)。抑制心肌收缩，桔抗钙离子流。

目前，尚未见高含量防风草二内酯的制备方法相关专利报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种从防风草叶中提取防风草二内酯的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种从防风草叶中提取防风草二内酯的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取干燥防风草叶，经粉碎处理，控制药材粒径为40目，加入用乙醇溶液，采用超高压法进行提取，合并提取液，浓缩回收乙醇，得到浸膏；

2）上述浸膏上氧化镁住，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集目标洗脱液，浓缩干燥得粗提物；

3）将上述粗提物进行色谱分离，得到防风草二内酯。

根据本发明的从防风草叶中提取防风草二内酯的方法进一步包括以下步骤4）：对含有防风草二内酯的洗脱液进行重结晶。该步骤具体如下进行：合并步骤3）中得到的防风草二内酯的洗脱液，蒸干后再用丙酮进行重结晶，从而得到防风草二内酯无色结晶。

所述步骤1）中乙醇溶液为80-90%乙醇水溶液。

所述步骤1）中固液体积比为1:12-1:18。

所述步骤1）中超高压提取压力为300-600MPa，温度为35-55℃，保压时间5-10min，重复升压卸压2-3次。

所述步骤2）中氧化镁为中性氧化镁，目数为100-200目，柱压为5-7.5bar，柱径高比为1:10-12。

所述步骤2）中石油醚-乙酸乙酯体积比为13:1-1:1。

所述步骤3）中色谱分离采用高速逆流色谱进行，其两相溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为5:7:5:3，高速逆流色谱仪转速为900-1050rpm，流动相流速为3.5-5ml/min。

本方法的积极效果是：

（1）本方法采用超高压法提取，溶剂消耗少，耗时短，得率高，且不会破坏有效成分的生物活性；

（2）柱层析过程中用石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，可替代通常所用的氯仿、甲醇等，安全无毒，环保；

（3）采用高速逆流色谱法，收率高、制备量大、制备周期短；

（4）工艺步骤操作较简单，易操作，能进行大规模生产，所得产品纯度高。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

取干燥防风草叶，经粉碎处理，控制粒径为40目，称取200g，加15倍80%乙醇溶液，采用超高压法进行提取，提取压力为400MPa，温度为35℃，保压时间5min，重复升压卸压2次，合并提取液，减压浓缩，进行色谱柱层析，层析柱以中性氧化镁为填料，粒度为100目，柱压为5bar，柱径高比为1:10，石油醚-乙酸乙酯12:1、5:1、1:1梯度洗脱，收集目标洗脱液，浓缩干燥得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的防风草二内酯，以体积比5:7:5:3正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，高速逆流色谱仪转速为1000rpm，泵入下相做流动相，流动相流速为4ml/min，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为208nm，收集防风草二内酯组分，进行真空浓缩，蒸干后再用丙酮进行重结晶，即得防风草二内酯无色结晶，含量96.7%。

实施例2：