[发明专利]多壁碳-聚苯胺-壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备

说明书

技术领域

本发明提供多壁碳-聚苯胺-壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备，属于生物传感器制备领域。

背景技术

我国是一个农业大国，农业发展对国民经济以及人民生活有着举足轻重的作用，而农药是当前农业生产用于防治病、虫、杂草对农作物危害不可缺少的物质，对促进农业增产有着重要的作用。但是，如果农药使用不当，农药造成的污染可以通过生物富集或食物链进入人体，给人类健康带来危害。随着我国人民生活水平不断提高，农产品的质量安全问题越来越受到关注，尤其果品、蔬菜中农药残留问题已经成为公众关注的焦点。全国每年都有上百起因食用被农药污染的农产品而引起的急性中毒事件，严重影响广大消费者的身体健康，因此由农药残留超标导致的食品安全问题，已越来越受到各国政府和公众的重视。有机磷农药是我国应用最为广泛的一类农药，其中毒死蜱是目前全世界生产和销售量最大的杀虫剂品种之一。毒死蜱是高效中毒的广谱杀虫剂兼除草剂，具有一定的内吸性，可以通过食物链的富集作用转移至人体，对人体具有潜在致癌作用。可见，加强对农产品中农药残留的检测对保护生态环境，尤其是保障人类健康有着十分深远的意义，其中毒死蜱一直是环境和食品中农药残留检测的重要项目。

传统的农药残留检测方法主要有：气相色谱（GC）、高效液相色谱法(HPLC)、色谱/质谱联用技术(GC/LC-MS)、毛细管电泳法(CE)、荧光分析、酶联免疫法(ELISA)。这些方法虽然选择性好、灵敏度高、准确度高、检出限低，可同时检测多种元素或化合物，但其需要昂贵的仪器设备，样品前处理过程繁琐、费时，并且对分析人员的技术水平要求很高，不适于现场快速检测。常用的农药残留快速检测方法有酶抑制法(酶抑制试纸法和酶抑制分光光度法)，可以实现有机磷农药的现场快速检测，具有较好的实用价值。但是，速测卡是通过肉眼观察卡片的颜色变化，因此一般只能用于严重超标的蔬菜样品的定性测量。酶抑制分光光度法的原理是基于吸光度的变化进行检测的，但蔬菜水果中大量的色素会影响检测结果的准确度。并且上述方法存在回收率低、错检、漏检比例较高、重复性差、难以满足低残留和定量检测的要求等缺点。免疫传感器是基于抗原和抗体特异性结合所引发的免疫反应的原理所研制的传感器，与传统的分析方法相比，它具有特异性强、分析速度快、结构简单、成本低廉等优点。免疫传感器的关键是敏感界面的构建，其直接影响生物分子的固定化、免疫传感器的稳定性、灵敏度和选择性等主要性能。

发明的目的在于提供一种能克服上述缺陷以及操作简单、灵敏度高、选择性好的检测毒死蜱农药残留的免疫传感器制备方法。

其技术方案为：多壁碳-聚苯胺-壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备，其特征在于：电流型免疫传感器的敏感界面组成包括由功能化多壁碳、聚苯胺、壳聚糖制备的三维纳米复合膜和纳米金胶(AuNPs)，进而固定抗毒死蜱的单克隆抗体(Ab)。

所述的多壁碳-聚苯胺-壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备，其特征在于：玻碳电极(d=3mm)的清洗，免疫传感器敏感界面的构建及过程表征(制备多壁碳-聚苯胺纳米复合材料并以壳聚糖作为分散剂进行分散，利用多壁碳-聚苯胺的协同作用共同修饰电极)，免疫传感器工作曲线的建立，免疫传感器性能的检测，免疫传感器对实际样品的检测。

所述的多壁碳-聚苯胺-壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备，其特征在于：实验条件的优化，主要包括抗体浓度、测试底液的pH以及孵育时间；所制备的电流型免疫传感器的工作曲线为：%ΔI = 9.2401 + 6.1659 LgC (ng/mL) (R²=0.9913，0.1-40 ng/mL)，%ΔI = -22.436 + 27.235 LgC (ng/mL) (R²=0.9904，40-500 ng/mL)；免疫传感器性能检测包括重现性、稳定性、再生性、特异性以及免疫传感器对蔬菜样品回收率的测定。