[发明专利]多壁碳-聚苯胺-壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备

权利要求书

1.多壁碳-聚苯胺-壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备，其特征在于：一种新型的多壁碳-聚苯胺-壳聚糖纳米复合材料和纳米金胶的制备，制备步骤为：

1）多壁碳-聚苯胺-壳聚糖纳米复合膜的制备：

采用原位聚合的方法制备聚苯胺包裹的多壁碳纳米复合材料，苯胺单体在使用之前在低压真空下提纯，120mg多壁碳以及1g苯胺单体同时加入到20mL 1M 的盐酸溶液中，超声2h形成均匀分散的溶液，然后将溶液置于冰浴搅拌，待溶液冷却后加入溶有过硫酸铵的盐酸溶液，其中过硫酸铵的物质的量与苯胺单体物质的量比例为1：1，为了能让苯胺单体完全聚合，溶液在0-5°C冰浴中持续恒力搅拌反应12h，聚合后的溶液抽滤收集产物，并依次用去离子水、甲醇和丙酮洗涤，最后真空干燥12h，将壳聚糖溶于1.0%的醋酸溶液中，配制成0.5% 壳聚糖溶液，室温下磁力搅拌至壳聚糖完全溶解，称取10mg多壁碳-聚苯胺加入到10mL 0.5% 壳聚糖溶液中，超声分散8h得到分散均匀的多壁碳-聚苯胺-壳聚糖纳米复合液;

2) 纳米金胶的制备：

采用柠檬酸三钠热还原氯金酸的方法，所有的玻璃器皿均用王水浸泡过夜，再用12mol/L的氢氧化钠水溶液浸泡2h，洗涤干净备用，将98mL去离子水和2mL 50mM氯金酸溶液混合，快速搅拌下加热至亚沸状态，即产生回流时，迅速加入10mL 38.8mM的柠檬酸三钠溶液，混合物加热至沸腾后，继续搅拌20min，这个过程中溶液由淡黄色转为无色，然后变灰黑色，最后成酒红色，除去热源后继续搅拌至室温下慢慢冷却，将冷却后的金胶溶液置于干净的棕色玻璃瓶中于4°C冰箱中避光保存备用，数月有效。

2.如权利要求1所述的多壁碳-聚苯胺-壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备，其特征在于：利用纳米金胶和多壁碳-聚苯胺-壳聚糖纳米复合膜协同作用共同修饰电极的免疫传感器制备步骤为：

取7μL制备好的多壁碳-聚苯胺-壳聚糖纳米复合膜滴涂在预处理好的玻碳电极表面，常温下静置2h，用PH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面；电极表面晾干后，取7μL纳米金胶滴涂在电极表面，常温下静置1.5h，然后用PH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗表面，氮气吹干；将上述经纳米材料修饰好的电极沉浸在毒死蜱单克隆抗体溶液中，4°C条件下浸泡8-12h，取出后用磷酸盐缓冲液冲洗表面，晾干待用；最后将上述制备好的电极浸于0.5%的牛血清蛋白溶液中，室温下静置2h，以封闭非特异性结合位点，取出置于室温下晾干，免疫传感器制作完成，保存在4°C条件下备用。