[发明专利]一种应用于核酸序列分析中的样品纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种应用于核酸序列分析中的样品纯化方法。

背景技术

在核酸序列分析中，聚合酶链式反应（PCR）被广泛应用于各种核酸测序仪平台。经聚合酶链式反应之后获得的样品成分复杂，在用DNA测序仪检测前必须进行纯化，并且纯化的效果对于最终的检测效果极为重要。目前广泛采用的乙醇沉淀法，通过向样品溶液中加入乙醇，经沉淀，离心后实现样品中目标成分与杂质成分分离。该方法比较难获得纯度很高的样品中的目标成分，检测结果中容易出现干扰峰；操作繁琐，耗时；需要大量人工操作，难以实现自动化。

发明内容

本发明的目的在于提供一种应用于核酸序列分析中的样品纯化方法，可以用较少的时间，简便地从样品中获得高纯度的目标成分，减少检测结果中的干扰峰；同时又能在不影响检测效果的前提下，减少检测所需的样品量以及其它试剂的用量，从而降低核酸测序的成本。

本发明提供了一种应用于核酸序列分析中的样品前处理方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）将用功能基团改性的纳米磁珠溶液分散于待纯化的样品溶液中并混合均匀，在室温下培育5分钟；

（2） 将混合溶液放置于磁力装置上2-3分钟；

（3）用移液器将混合溶液中的液体吸干后，再加入乙醇的水溶液，在室温下培育30秒，再将混合溶液中的液体吸干；

（4）再重复第3步1次；

（5）撤去磁力装置，向吸干液体的混合溶液剩余物中加入缓冲液，再混合均匀；

（6）将混合溶液放置于磁力装置上1分钟后，将混合溶液中的上清液吸取出来，可以直接在核酸序列分析仪上进行检测。

所述的方法中，用功能基团改性的纳米磁珠溶液与待纯化的样品溶液中的体积比为1:1-3:1，用功能基团改性的纳米磁珠溶液的浓度为10mg/mL-100mg/mL。磁珠的直径为50-800纳米，磁珠的组分和重量含量百分比为：氧化钆 20-50%，四氧化三铁20-40%，二氧化硅：10-60%。乙醇水溶液的体积浓度为50%-95%。

所述的磁力装置的磁场强度为0.1-1特斯拉。

所述的缓冲液的主要成分为水，三羟甲基氨基甲烷和氯化氢；三羟甲基氨基甲烷和氯化氢的摩尔比为1；1，pH值在7-9，浓度为0.005-0.05mol/L。操作过程中，加入缓冲液与待纯化的样品溶液的体积比1:2-1:4。

所述的待纯化样品为经过聚合酶链式（PCR）反应或者测序反应之后获得的样品。测序前的聚合酶链式（PCR）反应体系参见各种用于核酸序列分析的聚合酶链式（PCR）反应体系，以ABI公司的BigDye v3.1体系为例，聚合酶链式（PCR）反应体系（10 uL反应体系）的成分为： 0.5－4 uL of BigDye反应混合物，0-3 uL 的2.5X 缓冲溶液，10 pmol 引物，50-500 ng 的DNA模板，加入去离子蒸馏水至10 uL。

本发明操作简便，可以用较少的时间，简便地从样品中获得高纯度的目标成分，减少检测结果中的干扰峰；同时又能在不影响检测效果的前提下，减少检测所需的样品量以及其它试剂的用量，从而降低核酸测序的成本。

附图说明

图1. 反应体系的体积为5 μl，使用0.5μl BigDye v3.1进行反应，反应产物用乙醇沉淀法进行纯化的核酸片断检测图，采用Applied Biosystems公司的3730XL核酸序列分析仪进行分析。

图2. 反应体系的体积为5μl，使用0.125μl BigDye v3.1进行反应，反应产物用本发明中的方法进行纯化的核酸片断检测图，采用Applied Biosystems公司的3730XL核酸序列分析仪进行分析。

具体实施方式

通过下述实施例有助于进一步理解本发明，但并不限制发明的内容。

具体实施中采用Applied Biosystems公司的BigDye V3.1试剂盒，进行聚合酶链式反应，结果用Applied Biosystems公司的3730核酸序列分析仪进行分析。

实施例1对照实验