[发明专利]一种抗禽流感病毒的樟芝发酵全液活性物质提取的制备方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种抗禽流感病毒的樟芝发酵全液活性物质提取的制备方法，尤其涉及樟芝（Antrodia camphorata）Ac001，已于2005 年9月21日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”， 保藏编号为CGMCC No.1460。

（二）背景技术

 关于抗禽流感病毒的樟芝发酵全液活性物质提取的制备方法，经检索到的相关专利有：中国专利申请号为99112556.8 灰树花发酵液多糖提取方法， 02136517.2 灰树花发酵工艺及其多糖肽的生产方法，89105471 一种云芝糖肽（PSP）的生产方法，92109345 香菇多糖及香菇菌多糖提取工艺，96109095中国灵芝保健饮料，92111030灵芝营养保健液及其制法，93103116灵芝口服液等专利，这些专利内容大多以提取多糖为主要目的，其中灰树花、云芝和灵芝三种制备的活性物质提取物具有抗肿瘤、抗高血压、降低血糖、抗肥胖、抗肝炎等药效，但对于抗病毒作用鲜有报道，而对于抗禽流感病毒的报道更是没有检索到。

（三）发明内容

本发明要解决的问题是，针对上述抗禽流感病毒的樟芝发酵全液活性物质提取的制备方法以及其制备的发酵液提取物的药理作用所存在的不足，提供一种抗禽流感病毒的樟芝发酵全液活性物质提取的制备方法。利用本发明的方法提取的樟芝发酵全液活性物质对禽流感病毒具有明显的抑制作用，并且对正常细胞具有保护作用，且该方法具有工艺简便、产量高、成本低的特点。

本发明的抗禽流感病毒的樟芝发酵全液活性物质提取的制备方法，包括三种制备形式：其一为直接从樟芝发酵全液包括菌丝体与澄清液中分离出活性物质；其二为先将樟芝发酵全液分离成菌丝体与澄清液，再从所得菌丝体中分离出活性物质；其三为先将樟芝发酵全液分离成菌丝体与澄清液，再从所得澄清液中分离出活性物质。由以下步骤组成：

所述的抗禽流感病毒的樟芝发酵全液活性物质提取的制备方法，其特征是，所述樟芝菌丝体发酵全液提取物由下述方法制得：

 加热提取：取经液体发酵的樟芝发酵全液或菌丝体或澄清液放于容器内，调整其pH值为8～12，置60～120℃下加热100～240分钟，

 过滤：之后冷却、以180～200目的筛网过滤樟芝发酵全液或菌丝体或澄清液，收集滤液，滤渣以其4～8倍体积的蒸馏水稀释，重复上述操作1～2遍，再收集滤液；

减压浓缩：离心完毕后弃去滤渣，合并收集的滤液，在温度50～70℃，压力0.2～0.6Kg/cm²，真空度为0.02～0.06Mpa的条件下进行减压浓缩，使滤液浓缩至原有体积的1/10～1/20；

醇析：在浓缩滤液中，加入量为其体积4～8倍的醇溶液并不断搅拌，搅拌速度为60r/min，10～20分钟后，静置24～48小时进行醇析；

离心分离：醇析后弃上清液，沉淀物移入离心管中，以转速为3000～5000r/min离心20～30min，离心后弃去上清液，收集离心沉淀物；

收集物干燥：将上述收集的离心沉淀物，在50～70℃温度条件下干燥36～48小时； 

(7)收集物粉碎：取上述烘干的收集物，进行粉碎，经200目筛网过筛后，即为樟芝抗禽流感病毒活性物质提取物。其中，步骤所述的樟芝发酵全液是指樟芝（Antrodia camphorata）发酵液与菌丝体的集合体。

步骤所述的樟芝澄清液是指樟芝（Antrodia camphorata）发酵后澄清液。

步骤所述的樟芝菌丝体是指樟芝（Antrodia camphorata）菌株发酵所得菌丝体

所述樟芝通过以下步骤进行发酵：

（1）液体种子培养：采用500毫升三角瓶，每瓶装200毫升液体培养基，将10%的樟芝菌种以常规方法接种到装有液体培养基的三角烧瓶内，调节pH为3-8，培养温度为20-35℃，摇瓶转速为80-280r/min，培养7-15天，即可得到樟芝液体种子；

（2）发酵罐发酵：先将发酵罐中的培养基进行灭菌，灭菌压力为0.1～0.2公斤/平方厘米，灭菌时间为1-2小时；当樟芝液体种子pH值降至2.5-4时，将摇瓶中的樟芝种子接种到50L发酵罐的培养液中，调整pH为5-8，培养温度25-35℃，通气量0.5-1.1vvm，搅拌转速100-250r/min，培养7-30天。