[发明专利]T4化学发光体外诊断试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种T4检测试剂盒，具体涉及一种T4化学发光体外诊断试剂盒及其使用方法。 

背景技术

甲状腺素 (Thyroxin(e)，Thx，T4) 是甲状腺滤泡细胞合成及分泌的激素，以游离形式释放入血循环中并迅速与血浆蛋白相结合。甲状腺素又称四碘甲状腺原氨酸，由两个3，5-二碘酪氨酸分子偶联而成的一种碘化的酪氨酸衍生物，是甲状腺的主要激素。甲状腺素的化学本质为四碘甲状腺原氨酸，即T4，有DL,L,D型，其中L型活性强，D型活性较小。甲状腺素无臭，无味，遇光变质，熔点231-233℃（分解），不溶于水和乙醇等普通有机溶剂，但溶于含有无机酸或碱的乙醇，也溶于氢氧化碱和碳酸碱溶液。在其酸性乙醇溶液中加入亚硝酸钠，加热即呈黄色，再加过量氨水即变为粉红色。甲状腺素可由牛、羊、猪等的甲状腺中提取，也可人工合成。甲状腺素主要控制耗氧速率和总代谢速率。甲状腺素具有促进一般组织代谢，提高神经兴奋性和身体发育的作用，可用于治疗甲状腺机能减退，粘液性水肿和克汀病等。定量测定人血清游离T4（FT4）对甲状腺疾病的诊断，甲状腺的病理、生理研究有重要意义使用。

T4以前一直用放射免疫分析（RIA），放射免疫分析它既具有免疫反应的高特异性，又具有放射性测量的高灵敏度，因此能精确测定各种具有免疫活性的极微量的物质，但是放射免疫分析存在放射线辐射和污染等问题，用ELISA方法快速简便，既有放射免疫分析的优点，同时也减少了污染。

竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和固相抗原竞争结合酶标抗体，因此结合于固相的酶标抗体量与受检抗原的量成反比。操作步骤如下：（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原。洗涤。（2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗体的混合溶液，使之与固相抗原反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗体能顺利地与固相抗原结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗体以同样的机会与固相抗原结合，竞争性地占去了酶标抗体与固相载体结合的机会，使酶标抗体与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗体，保温后，酶标抗体与固相抗原的结合可达最充分的量。洗涤。（3）加发光液显色：参考管中由于结合的酶标抗体最多，信号值最高。参考管信号值与待测管信号值的大小，代表受检标本抗原的量。待测管信号值越低，表示标本中抗原含量越多。

由于半抗原都是小分子，本身很难具有好的抗原性，只能诱导动物产生很弱的免疫反应，因而与载体蛋白耦联是很重要的。

现在T4试剂盒比较多的为酶联免疫方法测T4，ELISA法也以快速，简单实效，而被广泛应用，但是相对于化学发光，不具有发光检测的高灵敏度和检测范围。 

发明内容

本发明的目的就是针对上述存在的缺陷而提供一种T4化学发光体外诊断试剂盒及其使用方法。本发明对于那些极性强，分子量小的半抗原无法包被于固相载体进行检测，提供了一种使用方便的试剂盒，解决了半抗原包被不佳的情况，便于快速、灵敏的进行T4的检测。

本发明的一种T4化学发光体外诊断试剂盒及其使用方法技术方案为，该T4化学发光体外诊断试剂盒，包括微孔板、校准品、质控品、酶结合物、发光底物液和浓缩洗涤液；其中微孔板中含有小分子半抗原T4耦联载体蛋白得到的小分子耦联蛋白；校准品与质控品为已知浓度的T4抗原；酶结合物中含有T4酶标抗体。

发光底物液包括发光底物液A和发光底物液B，发光底物液A含有鲁米诺，发光底物液B含有辣根过氧化物酶稳定剂、过氧化氢；浓缩洗涤液中含有氯化钠和吐温-20。

微孔板中含有的小分子耦联蛋白，是将小分子半抗原T4耦联载体蛋白BSA得到的小分子耦联蛋白。

所述的小分子耦联蛋白，为使用EDC将小分子半抗原T4和载体蛋白BSA进行耦联得到的小分子耦联蛋白。

将小分子半抗原T4和载体蛋白BSA进行耦联具体方法为： 

① 平衡EDC，NHS至室温；

②将EDC、NHS、BSA分别用活化缓冲液溶解； 

③将2-4体积份的EDC溶液与5-10体积份BSA溶液混合后，加入与EDC等量的NHS溶液，室温反应10-20分钟，后再加入1-2体积份的EDC；再室温反应10-20分钟；

④加入巯基乙醇终止EDC反应，得到活化蛋白EDC-BSA；

⑤加入与活化蛋白等摩尔的目的小分子半抗原T4，室温反应1.5-3小时；

⑥加入Tris终止反应，得到耦联蛋白BSA-T4；