[发明专利]T4化学发光体外诊断试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种T4化学发光体外诊断试剂盒，其特征在于，包括微孔板、校准品、质控品、酶结合物、发光底物液和浓缩洗涤液；其中微孔板中含有小分子半抗原T4耦联载体蛋白得到的小分子耦联蛋白；校准品与质控品为已知浓度的T4抗原；酶结合物中含有T4酶标抗体。

2.根据权利要求1所述的T4化学发光体外诊断试剂盒，其特征在于，发光底物液包括发光底物液A和发光底物液B，发光底物液A含有鲁米诺，发光底物液B含有辣根过氧化物酶稳定剂、过氧化氢；浓缩洗涤液中含有氯化钠和吐温-20。

3.根据权利要求1所述的T4化学发光体外诊断试剂盒，其特征在于，微孔板中含有的小分子耦联蛋白，是将小分子半抗原T4耦联载体蛋白BSA得到的小分子耦联蛋白。

4.根据权利要求3所述的一种T4化学发光体外诊断试剂盒，其特征在于，所述的小分子耦联蛋白，为使用EDC将小分子半抗原T4和载体蛋白BSA进行耦联得到的小分子耦联蛋白。

5.根据权利要求4所述的T4化学发光体外诊断试剂盒，其特征在于，将小分子半抗原T4和载体蛋白BSA进行耦联具体方法为：

① 平衡EDC，NHS至室温；

②将EDC、NHS、BSA分别用活化缓冲液溶解； 

③将2-4体积份的EDC溶液与5-10体积份BSA溶液混合后，加入与EDC等量的NHS溶液，室温反应10-20分钟，后再加入1-2体积份的EDC；再室温反应10-20分钟；

④加入巯基乙醇终止EDC反应，得到活化蛋白EDC-BSA；

⑤加入与活化蛋白等摩尔的目的小分子半抗原T4，室温反应1.5-3小时；

⑥加入Tris终止反应，得到耦联蛋白BSA-T4；

⑦加入脱盐柱，将里面的储存液排出，然后加入PBS以同样的转速离心3-5次后，加入反应的耦联蛋白，离心后，即为耦联产物。

6.根据权利要求5所述的T4化学发光体外诊断试剂盒，其特征在于，步骤②中活化缓冲液包括：0.1M的MES，0.5M的NACl，调节pH为6.0。

7.根据权利要求5所述的T4化学发光体外诊断试剂盒，其特征在于，步骤②中EDC用活化缓冲液溶解，终浓度为45-55mg/mL，NHS同样用活化缓冲液溶解，终浓度为45-55mg/mL，BSA用活化缓冲液溶解，终浓度为4.5-5.5mg/mL。

8.根据权利要求5所述的T4化学发光体外诊断试剂盒，其特征在于，步骤⑥中Tris为20-50 mmol/L。

9.根据权利要求5所述的T4化学发光体外诊断试剂盒，其特征在于，耦联好的蛋白包被方式制备试剂盒，步骤为：

① 将含有定量小分子耦联蛋白的包被液加入到微孔板中，37度放置2小时；

② 甩干板条，加入封闭液，37度放置2小时；

③ 洗涤一次后，放入真空干燥箱4-6小时；

④ 真空封袋后，放入4度冰箱。

10.如权利要求1所述的T4化学发光体外诊断试剂盒的使用方法，其特征在于， 

①分别往微孔板中加入校准品、质控品和待测样本，再往微孔板中加入酶结合物，充分混匀， 37℃反应50-80分钟；

②加入洗涤液洗涤3-6次，每次加洗涤液量为300-400uL；

③然后向微孔板中加入发光底物液，放入化学发光分析仪中读数，计算数据，得出待测样本中小分子半抗原T4的量。