[发明专利]从莫勒菌中提取5α,8α-环二氧-24(R)-甲甾-6,22-二烯-3β-醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从莫勒菌中提取一种甾体化合物5α, 8α-环二氧-24(R)-甲甾-6,22-二烯-3β-醇的方法。

背景技术

虫生真菌生态学上被认为是一种寄生在昆虫体内或者外壳表面，并最终能够引起宿主昆虫死亡的一种真菌，这种真菌是产生天然活性化合物的重要资源，莫勒菌(Moelleriella)是虫生真菌的重要成员，隶属于粪壳菌纲，肉座菌目，麦角菌科。随着研究的深入，近年来人们发现莫勒菌的代谢产物具有抗菌、抗肿瘤和抗疟原虫等生物活性，这预示该菌在生物农药或医药上存在很大应用价值。

  5α,8 α- 环二氧-24(R )-甲甾-6,22-二烯-3β-醇,有一定的细胞毒活性和抗疟原虫活性，是一种麦角固醇的衍生物，而麦角固醇是麦角固醇是一种重要的医药化学原料，所以该化合物含有很重要的潜在的医学价值，有待进一步活性研究。 

发明内容

本发明的目的是提供从莫勒菌中提取一种甾体化合物5α,8 α- 环二氧-24(R )-甲甾-6,22-二烯-3β-醇的方法。

本发明采取的技术方案如下： 

一种从莫勒菌中提取甾体化合物5α, 8α- 环二氧-24(R )-甲甾-6,22-二烯-3β-醇的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

1）将莫勒菌活化后，取菌块接种PDB培养基中，在120 r/min、26℃条件下连续培养7天，按10％接种量再次转接到PDB培养基中，继续在120 r/min、26℃条件下连续培养31天得发酵物； 

2）发酵物经抽滤得到菌丝体，菌丝体在35℃下恒温干燥后，用甲醇浸提后旋蒸浓缩至干，用水溶解后用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩得浸膏；

3）将浸膏上200~300目硅胶柱，进行粗分；分别以石油醚：二氯甲烷=(3:1, 2:1, 1:1)减压硅胶柱洗脱。

4）将3）中得到的石油醚：二氯甲烷1:1洗脱成分,经减压浓缩后上200~300目硅胶柱，以石油醚：乙酸乙酯体积比=5:1等度洗脱，经TLC分析，收集相同Rf值相同的洗脱液，旋蒸浓缩。

所述步骤1）中接种菌块的大小为0.5×0.5cm，接种量为5块。

所述步骤2）中浸提要用1-3倍体积甲醇浸提48小时，每8小时超声20分钟。

所述步骤2）中具体操作为：发酵物经抽滤得到菌丝体，菌丝体在35℃下恒温干燥后，用甲醇浸提后旋蒸浓缩至干，用200mL水溶解后与乙酸乙酯按体积比1：1.5混合，倒入分液漏斗中，摇瓶萃取菌液3~5次，每次5～10min。

所述步骤4）中石油醚：乙酸乙酯体积比=5:1等度洗脱，收集TLC分析中以石油醚：丙酮=3：1为展开剂时R_f值为0.2-0.3的组分。

本发明的技术效果：

本发明以繁殖快、周期短的真菌为材料，成本低，操作简单，重复性好，无需昂贵的仪器，通过多次进行硅胶柱层析，制得了一种甾体化合物5α,8 α- 环二氧-24(R)-甲甾-6,22-二烯-3β-醇。

附图说明

图1 单体化合物TLC（石油醚：丙酮=3:1）

图2 化合物的的¹H NMR谱

图3 化合物的¹³C NMR谱

图4化合物的¹³C NMR谱(下)和DEPT 135谱(上)

图5化合物的COSY谱

图6化合物的HSQC谱

图7化合物的HMBC谱

图8化合物的NOSEY谱

图9化合物的EI-MS谱

图10化合物的化学结构。

 

具体实施方式

实施例1：甾体化合物5α,8 α- 环二氧-24(R )-甲甾-6,22-二烯-3β-醇的制备