[发明专利]一种化学发光测定三聚氰胺的方法

权利要求书

1.一种化学发光测定三聚氰胺的方法，其特征是包括以下步骤：

FMB1的制备：将磁性金纳米粒子用磷酸缓冲液洗涤后，加入200 μl 1.0×10^-5 M的DNA1和1.0×10^-5 M的DNA2混合物，在37°C下反应12小时；将所得的功能化磁性金纳米粒子（FMB1）用磷酸盐缓冲液洗涤，然后分散在磷酸盐缓冲液中，保存在4°C下备用；

FMB2的制备：将磁性金纳米粒子用磷酸缓冲液洗涤后，100 μl 1.0×10^-5 M的H1，在37°C下反应12小时；将所得的功能化磁性金纳米粒子（FMB2）用磷酸盐缓冲液洗涤，然后分散在磷酸盐缓冲液中，保存在4°C下备用；

制备HRP（辣根过氧化物酶）修饰的H1：在100 μl 1.0×10^-5 M的H1加入10 mg NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）， 20 mg EDC（1-（3-二甲氨基醛）-3-乙基二亚胺盐酸盐），在37 °C下搅拌1小时，然后加入100 μl HRP，在37 °C下搅拌过夜，即得；

制备HRP修饰的H2：在100 μl 1.0×10^-5 M的H2加入10 mg NHS， 20 mg EDC，在37 °C下搅拌1小时，然后加入100 μl HRP，在37 °C下搅拌过夜，即得；

1.5 Me（三聚氰胺）的检测：取含Me的标准溶液50 μL加入到200 μL的FMB1溶液，37°C反应40分钟，然后混合物在磁力架上分离，将上清液转移到FMB2溶液中；然后加入含有 5.0×10^-7 M HRP-H1和 5.0×10^-7 M HRP-H2溶液200 μL，在 37 ℃反应 1 h后进行磁分离，除去上清液，将磁珠用 100 μL磷酸缓冲溶液清洗两遍后，分散于1.0 ml磷酸缓冲溶液中，然后进行化学发光检测。

2.权利要求1所述的DNA序列为：

2.1 DNA1的部分序列为：5′-TTT TTT TTT TTT CCA AAA GGG-(CH₂)₆-SH-3；

2.2 DNA2的部分序列为：5′-TGG AAA AAA AAA AAA-3′；

2.3 H1的部分序列为：5′-NH₂-(CH₂)-GCG AGG TTT TTT TTT TTT CCA GCG CCG CAC AGA    TGG AAA AAA  AAA AAA-3′；

2.4 H2的部分序列为: 5′-TGG AAA AAA AAA AAA AGG GTA GCG CCG TTT TTT TTT TTT CCA ATT AGA-(CH₂)₆-NH₂-3′。

3.根据权利要求1所述的化学发光测定三聚氰胺的应用。