[发明专利]25羟-维生素D3定量免疫层析检测试剂卡及其制备方法

权利要求书

1.一种25-羟基维生素D3定量免疫层析检测试剂卡，包括依次形成有稀释液孔（1）、加样孔（2）和观察窗（3）的盒盖（4），盒体（5）内底部形成的检测试纸条架（6）一端形成有端护栏（7），另一端形成有侧护栏（8），盒盖（4）底面形成的插突起（9）与盒体（5）的插孔柱（10）插接结合；以及沿检测试纸条架（6）长度方向平铺的检测试纸条（11），检测试纸条（11）的塑料基板（12）两端分别设置的样品垫（13）和吸样垫（14），其特征在于：样品垫（13）和吸样垫（14）之间依次设置有：含有胶体金标记的25-羟基维生素D3抗体的胶体金垫（15），分别包被有25-羟基维生素D3偶联蛋白的T线（16）和抗鼠IgG的C线（17）的NC膜（18）。

2.权利要求1所述25-羟基维生素D3定量免疫层析检测试剂卡的制备方法，包括依次形成有稀释液孔（1）、加样孔（2）和观察窗（3）的盒盖（4），盒体（5）内底部形成的检测试纸条架（6）一端形成有端护栏（7），另一端形成有侧护栏（8），盒盖（4）底面形成的插突起（9）与盒体（5）的插孔柱（10）插接结合；以及沿检测试纸条架（6）长度方向平铺的检测试纸条（11），检测试纸条（11）的塑料基板（12）两端分别设置有样品垫（13）和吸样垫（14），其特征在于：样品垫（13）和吸样垫（14）之间依次设置有：含有胶体金标记的25-羟基维生素D3抗体的胶体金垫（15），分别包被有25-羟基维生素D3偶联蛋白的T线（16）和抗鼠IgG的C线（17）的NC膜（18）；

所述样品垫（13）和吸样垫（14）之间依次设置有含有胶体金标记25-羟基维生素D3抗体的胶体金垫（15），分别包被有25-羟基维生素D3偶联蛋白的T线（16）和抗鼠IgG的C线（17）的NC膜（18），其中：

a.含有胶体金标记的25-羟基维生素D3抗体的胶体金垫（15）的制备过程为：金颗粒直径为30～50nm的胶体金溶液10ml，于烧杯内用0.2M K₂CO₃调至pH7.5～8.5，加入25～75μg 25-羟基维生素D3抗体，室温搅拌30min，加入终浓度为0.5%牛血清白蛋白，5% PEG 20000 封闭20min，12000g离心20分钟，弃上清，用胶体金溶液复溶至80ml，按1ml溶液铺20cm²的比例均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上，置干燥间干燥3～5小时，制成胶体金垫（15）；

b.所述NC膜（18）抗体的包被过程为：以0.01M pH 7.4 磷酸盐缓冲液将25-羟基维生素D3-偶联蛋白配制成0.8～1.6mg/ml的溶液，在NC膜（18）上用喷膜仪以1～1.5μl/cm的量包被T线（16）；另将抗鼠IgG配制成1～3mg/ml的溶液，用喷膜仪以上述相同参数包被C线（17），划线后将NC膜（18）干燥3～5小时，制成包被25-羟基维生素D3-偶联蛋白的T线（16）和包被抗鼠IgG的C线（17）的NC膜（18）；

c.在相对湿度小于30%的条件下，取塑料基板12，将已包被的NC膜（18）粘贴在塑料基板（12）的中部，在NC膜（18）的T线（16）一侧粘贴胶体金垫（15），在胶体金垫（15）另一侧粘贴样品垫（13）；在NC膜（18）的C线（17）一侧粘贴吸样垫（14）；邻接接口相互叠压1～2mm，粘贴好的大板切成3～5mm宽的检测试纸条（11）备用。