[发明专利]骨碱性磷酸酶检测试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种骨碱性磷酸酶检测试纸，包括反应底板(5)，粘贴于反应底板(5)中部的硝酸纤维素膜(3)、分别搭接于硝酸纤维素膜(3)两侧的胶体金垫(2)、吸水滤纸(4)和与胶体金垫(2)搭接的样品垫(1)，其特征在于所述硝酸纤维素膜(3)上按顺序依次平行设置有骨碱性磷酸酶多克隆抗体构成的检测条带(6)和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控条带(7)，所述胶体金垫(2)由含有胶体金标记的骨碱性磷酸酶单克隆抗体涂覆于无纺布上而构成的。

2.根据权利要求1所述的骨碱性磷酸酶检测试纸，其特征在于：所述样品垫(1)的一端重叠设置在胶体金垫(2)一端的上方，胶体金垫(2)的另一端重叠设置在硝酸纤维素膜(3)一端的上方，且位于骨碱性磷酸酶多克隆抗体检测条带(6)一端，所述硝酸纤维素膜(3)靠近羊抗鼠 IgG 多克隆抗体质控条带(7)的一端重叠设置在吸水滤纸(4)一端的下方。

3.根据权利要求1所述的骨碱性磷酸酶检测试纸，其特征在于：所述骨碱性磷酸酶多克隆抗体检测条带(6)与羊抗鼠 IgG 多克隆抗体质控条带(7)之间距离为5-7毫米。

4.根据权利要求1所述的一种骨碱性磷酸酶检测试纸的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

①胶体金垫(3)的制备：

a. 用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30-50nm 的胶体金溶液；

b. 取100ml上述胶体金溶液，用0.2M的K₂CO₃溶液调节胶体金溶液至pH=9.0；

c. 将上述pH=9.0的胶体金溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每100ml溶液加入0.5mg~1.5mg骨碱性磷酸酶抗体，缓慢滴加到胶体金溶液中；

d. 持续搅拌1小时后，加入浓度为10%~20%的BSA牛血清白蛋白至终浓度为0.2％和浓度为20%的PEG聚乙二醇20000至终浓度为0.1％，搅拌30分钟，以12000rpm的转速离心30分钟，弃上清，沉淀用pH=9.0的胶体金溶液复溶至76.5ml；

e. 按1ml溶液铺16cm²的比例将步骤d得到的溶液均匀地铺在无纺布上，再将无纺布置于温度20～25℃、湿度小于30％的干燥间干燥2～4 小时，制成胶体金垫(3)；

②硝酸纤维素膜(3)上检测条带(6)和质控条带(7)的制备：

将1mg/mL后的骨碱性磷酸酶多克隆抗体溶液用喷膜仪在硝酸纤维素膜上按1.0ul/cm 划线包被，构成检测条带(6)；

将2mg/mL后的羊抗鼠IgG抗体溶液用喷膜仪在硝酸纤维素膜上按1.0ul/cm 划线包被，构成质控条带(7)；

包被完成后，将硝酸纤维素膜(3)置于干燥间干燥3～4 小时，即制成包被的硝酸纤维素膜(3)；

③骨碱性磷酸酶联合检测试纸的装配：

在温度为20～25℃、湿度小于30％的干燥室内，取反应底板(5)，将已包被的硝酸纤维素膜(3)粘贴在底板(5)的中部，在硝酸纤维素膜(3)靠近检测条带(6)的一侧搭接胶体金垫(2)，在胶体金垫(2)的另一侧搭接粘贴样品垫(1)，在硝酸纤维素膜靠近质控条带(7)的一侧距边缘搭接吸水滤纸(4)；然后用裁剪机将贴好的底板切成宽度为3-5mm的试纸条。