[发明专利]一种全细胞转化高效生产α-苯丙酮酸的方法无效
| 申请号： | 201310392427.6 | 申请日： | 2013-09-02 |
| 公开（公告）号： | CN103642743A | 公开（公告）日： | 2014-03-19 |
| 发明（设计）人： | 陈坚;刘龙;堵国成;李江华;侯颖 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P7/40;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 何自刚;王玉松 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞 转化 高效 生产 丙酮酸 方法 | ||
1.一种用于生产α-苯丙酮酸的基因工程菌，其特征在于，是重组表达了脱氨酶基因的大肠杆菌。
2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述脱氨酶基因来源于奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)。
3.一种构建权利要求2所述基因工程菌的方法，其特征在于，具体步骤为以P.mirabilis KCTC2566的基因组DNA为模板，PCR扩增核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的脱氨酶基因后连接到载体pET-20b(+)，将所得重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。
4.权利要求1所述基因工程菌在生产α-苯丙酮酸中的应用。
5.一种应用权利要求2所述基因工程菌全细胞转化高效生产α-苯丙酮酸的方法，其特征在于，将种子培养液按1%的接种量接种到发酵培养基中，37℃培养至OD为1.0，添加终浓度0.4mM的IPTG，30℃诱导5h，收集细胞，将1.4-25.2g/L细胞、4-24g/L底物L-苯丙氨酸，pH5-9，25-45℃条件下，转化6-36h，将转化体系进行离心，上清含α-苯丙酮酸。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述底物L-苯丙氨酸浓度为14.0g/L，细胞浓度为8.4g/L，35℃，转化16h。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，种子培养基组成为：蛋白胨1g，酵母粉0.5g，NaCl1g，自来水定容至100mL。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，发酵培养基组成为：蛋白胨12g，酵母提取物24g，甘油4mL；各组分溶解后高压灭菌，冷却到60℃，再加100mL灭菌的含17mmol/LKH2PO4和72mmol/L K2HPO4的溶液。
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