[发明专利]一种五加芪口服液的质量检验方法

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种五加芪口服液的质量检验方法，该方法可用于对五加芪口服液的质量进行综合评价。

背景技术

随着养殖业向集约化和工厂化发展，畜禽对病原微生物的易感性不断增加，病害频繁发生，为了防治疾病，传统做法是大量使用抗生素类药物，结果使耐药菌株不断增多，导致畜禽免疫功能急剧下降、生长受阻，抗生素的滥用还导致疫苗接种反应增强，副作用加大或使免疫接种失败，给养殖业造成很大的经济损失。

免疫增强剂是一类单独或与抗原同时使用增强动物机体非特异性和特异性免疫的物质，目前使用的免疫增强剂种类很多，包括生物性免疫增强剂，如干扰素；化学性免疫增强剂，如左旋咪唑等，其存在着高剂量产生免疫抑制或对机体有害等缺点，研制开发无毒害、作用强的新型中药免疫增强剂已成为迫切需要。

五加芪口服液由黄芪和刺五加两味中药组成，处方来源于《国家中成药标准》中的灵芪加口服液，灵芪加口服液由灵芝、黄芪和刺五加三味中药组成，从节约养殖成本上考虑去除价格昂贵的灵芝，并通过小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验筛选出黄芪与刺五加的最佳比例。本处方具有补中益气、扶正祛邪的功能，临床用于提高机体免疫力，配合疫苗使用提高疫苗免疫效果。临床试验结果表明，五加芪口服液以每升水1ml混饮，连用7日，能够提高鸡非特异性免疫能力、鸡新城疫和禽流感（H9）抗体水平以及鸡的生产性能。

五加芪口服液是根据传统中医理论开发的中药免疫增强剂，尚无质量标准，不利于控制其质量，为保证临床使用安全、有效和稳定，有必要建立一个完善的质量标准及其检验方法。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种五加芪口服液的质量检验方法。通过建立和实施该检验方法，可增强该药的有效性、质量可控性和稳定性。

本发明提供的五加芪口服液的质量检验方法，包括对五加芪口服液进行定性分析和定量检测，其中定性分析包括采用薄层色谱法对五加芪口服液中的黄芪甲苷和异嗪皮啶的分别鉴定，定量检测包括对五加芪口服液中的黄芪甲苷含量和总糖含量分别采用高效液相色谱法和紫外-可见分光光度法进行检测。

本发明中五加芪口服液的处方为：黄芪800g，刺五加200g。

本发明的五加芪口服液的质量检验方法包括如下内容：

一、黄芪的鉴定

由于黄芪甲苷是黄芪的特征化学成分，因此本发明中对五加芪口服液中的黄芪进行鉴定主要是鉴定其中的黄芪甲苷。采用的鉴定方法为薄层色谱法，包括如下步骤：

（1）制备待测样品溶液

取五加芪口服液3ml，加水27ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使之溶解，作为待测样品溶液。

（2）制备对照样品溶液

取黄芪甲苷对照样品，加甲醇制成每1ml甲醇含0.5mg黄芪甲苷的溶液，作为对照样品溶液。

（3）采用薄层色谱法鉴定五加芪口服液中的黄芪

吸取上述步骤（1）和（2）中的两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（体积比为13:7:2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%（v/v）硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰。如果待测样品色谱中，在与对照样品色谱相应的位置上，显示与对照样品相同颜色的斑点，则说明待测样品中含有黄芪甲苷，即含有黄芪。

二、刺五加的鉴定

由于异嗪皮啶是刺五加的特征化学成分，因此本发明中对五加芪口服液中的刺五加进行鉴定主要是鉴定其中的异嗪皮啶。采用的鉴定方法为薄层色谱法，包括如下步骤：

（1）制备待测样品

取五加芪口服液30ml，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为待测样品溶液。

（2）制备对照样品溶液

取异嗪皮啶对照样品，加甲醇制成每1ml甲醇含0.5mg异嗪皮啶的溶液，作为对照样品溶液。

（3）采用薄层色谱法鉴定五加芪口服液中的刺五加

吸取上述步骤（1）和（2）中的两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（体积比为19:1:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯（365nm）下进行检视。如果待测样品色谱中，在与对照样品色谱相应的位置上，显示与对照样品相同的蓝色荧光斑点，则说明待测样品中含有异嗪皮啶，即含有刺五加。

三、黄芪甲苷含量的检测