[发明专利]用于生产人纤维蛋白原的增溶工艺

说明书

技术领域

本发明涉及血液制品领域，特别涉及一种用于生产人纤维蛋白原的增溶工艺。 

背景技术

人纤维蛋白原主要由肝脏合成，人体含量约为2.5～4.0g/L左右，大部分存在于人体血浆中，仅有不到20%存在于血管外。主要用于先天性、获得性纤维蛋白原减少症、严重肝脏损伤、肝硬化、DIC以及手术或者产后大出血等的治疗，是临床上用于大出血止血的必备急救药品之一。目前生产人纤维蛋白原主要有两种方法：一种是以血浆离心上清液经低温乙醇分离，生产出的组分I为原料，制得成品，但该工艺主要存在纯度不高的问题，生产出来的制品纯度都在80%以下，产品杂质含量偏多，患者在注射使用时，容易发生不良反应；一种是以冷沉淀为原料，通过抽提、吸附、离心、层析等制造工艺得到，采用冷沉淀为原料，通过抽提、吸附、离心、层析等制造工艺得到的人纤维蛋白原沉淀溶解性低（该法得到的成品溶解度低），溶解困难。通过添加聚山梨酯80可以达到增强纤维蛋白原在溶解液中的溶解性，提高制品的质量、纯度和最终收率的目的。通过添加聚山梨酯80可以增强纤维蛋白原在溶解液中的溶解性，达到提高制品的质量、纯度和最终收率的目的。 

聚山梨酯80，化学名为聚氧乙烯20山梨醇酐单油酸酯，为淡黄色至橙黄色的粘稠液体。易溶于水、甲醇、乙醇和醋酸乙酯，在矿物油中极微溶解，属于亲水型非离子表面活性剂，为药物制剂中常用的辅料之一。由于其结构中具有较长的碳链结构，对亲脂性药物有较好的助溶作用，在制备难溶性药物制剂时，常用作助溶剂、乳化剂和稳定剂等。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种纯度高，溶解性好，稳定性高，灭活病毒效果好的生产人纤维蛋白原的増溶工艺。 

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：用于生产人纤维蛋白原的增溶工艺，主要步骤如下： 

（1）原料血浆处理：将原料血浆在5000～20000rpm的速度下进行连续离心分离，得到冷沉淀； 

（2）冷沉淀溶解、离心：在每公斤步骤1)所得的冷沉淀中加入3～8L注射用水，所得溶解液加热至20～40℃，搅拌使沉淀完全溶解，将其pH值调节到6.6～7.4，加入氢氧化铝凝胶，然后以5000～20000rmp的速度进行连续离心分离，离心所得上清液用洁净过滤器进行洁净过滤； 

（3）病毒灭活：添加吐温80和磷酸三丁酯（TNBP），将所得液体在专用的病毒灭活罐内，以40～l00rmp低速搅拌，在24～26℃条件下保温6～8小时； 

（4）层析精制：在步骤（3)所得的溶液中加入枸橼酸钠、氯化钠、甘氨酸缓冲液，通过凝胶层析柱进行吸附，经层析柱流出来的液体另行收集，用于人纤维蛋白原的制造； 

（5）离心分离：在步骤（4）所收集的液体中添加甘氨酸，待甘氨酸充分溶解完全后，将溶液冷却至0～10℃，用离心机对其以5000～20000rmp的速度进行连续离心分离，得到人纤维蛋白原沉淀； 

（6）沉淀溶解：对步骤（5）所得沉淀加入聚山梨酯80进行溶解，得到溶解液； 

（7）除菌过滤：使用灭菌好的过滤器对步骤（6)所得的液体进行除菌过滤； 

（8）分装、冻干：对步骤（7)所得的液体进行分装，然后进行冻干，冻干时间为4～8天，冻干前先使冻干机急速冻结至-40℃以下，注意冻干过程前后和整个过程中，制品的温度不能超过35℃，冻干后制品在真空状态下完全密闭胶塞，在冻干机内部注入无菌空气，使压力达到平衡。 

按上述方案，步骤（2）中按每公斤冷沉淀加入100～110g氢氧化铝凝胶。 

按上述方案，步骤（4）枸橼酸钠、氯化钠、甘氨酸缓冲液配制比例为7:5:18。 

按上述方案，步骤（5)中在0～4℃的条件下进行离心。 

按上述方案，步骤（6）所述的沉淀溶解的具体步骤是：在每公斤步骤（5）所得沉淀物中加入5～10L注射用水，按每升溶解水加入12～15g枸橼酸钠、20～30g盐酸精氨酸、3～10g氯化钠、10-15g甘氨酸，调节pH6.8～7.4，升温30～40℃。 

按上述方案，在步骤（6）所得溶解液中加入聚山梨酯80，其用量为30～50μg/ml溶解液。 

按上述方案，在步骤（3）使溶液中吐温80的最终浓度为1%，磷酸三丁酯最终浓度为0.3%。 

按上述方案，在步骤（5）使所得混合溶液中甘氨酸的浓度为3mol/L。