[发明专利]一种阿齐沙坦的高效液相色谱分析方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种化学药物纯度的分析方法，具体地说是一种阿齐沙坦原料及其制剂中有关物质的高效液相色谱分析方法。

二、背景技术

阿齐沙坦（azilsartan），化学名为2-乙氧基-1-[[2'-(4,5-二氢-5-氧代-1,2,4-噁二唑-3-基)联苯基-4-基]甲基]-1H-苯并咪唑-7-羧酸，化学结构式如下式（I）：

阿齐沙坦是一种血管紧张素II受体拮抗剂，由日本武田公司开发，2012年5月在日本上市。临床结果显示，按20mg/d、40mg/d服用阿齐沙坦，24h平均动态血压收缩压的降幅明显优于奥美沙坦酯和缬沙坦，并且阿齐沙坦还能通过部分激活过氧化物酶体增殖物激活受体-γ而对糖尿病患者产生潜在的保护作用，显示出非常良好的临床特征，被认为是用以评价降压药临床效果的黄金标准用药。

阿奇沙坦杂质较多，从结构上看，杂质主要来源于联苯母核引入的侧基（4,5-二氢-5-氧代-噁二唑环侧基、苯并咪唑侧基）改变有关，杂质均具有联苯母核结构，极性相近杂质诸多；从来源看，阿齐沙坦原料的杂质主要来源于合成过程中引入的反应原料、合成中间体、反应副产物及降解杂质，阿齐沙坦制剂的杂质来源于原料引入杂质、工艺杂质及降解杂质。Stanislav Rádl等（Stanislav Rádl,etc,Org.Process Res.Dev.2013,17,77-86）报道了由阿齐沙坦合成阿奇沙坦酯的反应跟踪HPLC图，但未报到具体分析方法。

阿齐沙坦原料及其制剂有关物质分析方法目前还没有相关的文献报道。

三、发明内容

本发明目的在于提供一种有效的控制阿齐沙坦原料及其制剂中有关物质的分析方法。

针对现有文献对阿齐沙坦原料及其制剂杂质鉴定研究的缺失，发明人通过工艺试制、强制降解试验对阿齐沙坦杂质进行富集、分离提纯，鉴定了10个主要已知杂质，并且对杂质进行了溯源归属，包括阿齐沙坦合成中间体（杂质D、杂质E、杂质I、杂质J）、阿齐沙坦合成副产物（杂质A、杂质C、杂质F、杂质H）及降解杂质（杂质B、杂质G）。

发明人曾试图通过等度洗脱分离各已知杂质，但在保证各杂质达到基线分离的情况下色谱保留时间大于1.5h，耗时，不实用。因此，改用梯度洗脱法，经对流动相组成及比例的优化筛选，确定本发明的分析方法。同时按中国药典2010年版二部附录V D（高效液相色谱法）及附录XIX A（药品质量标准分析方法验证指导原则）的定义和验证方法，进行专属性验证，结果表明该方法可同时分析阿齐沙坦原料及其制剂中的所有已知杂质，并且可通过加校正因子的主成份自身对照法有效控制各已知杂质含量，各杂质峰之间及主峰与相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，主峰与各杂质峰峰纯度均为1.0。

所述的“峰纯度”是指采用配有相应分析软件的光二极管阵列检测器，采集、记录、分析经色谱柱分离组份的光谱数据，自动生成的表征特定分离组份对应的光谱特征一致性的加权值。

本发明通过以下技术方案来实现：

采用反相色谱柱及紫外检测器，以乙腈-低浓度的醋酸水溶液为流动相，进行梯度洗脱。包括如下步骤：

（1）样品配制：取阿齐沙坦原料或制剂粉末，用体积比3∶2的乙腈-水溶液超声溶解，过滤或者离心，配制成含阿齐沙坦0.1～2.0mg/ml的溶液；

（2）色谱条件设置：采用反相C18柱，柱温设置在20℃～50℃；以体积比57∶40～46的乙腈-低浓度的醋酸水溶液为流动相A，以体积比90∶9～11的乙腈-低浓度的醋酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；流速为0.5ml/min～2.0ml/min；检测波长为210nm～270nm；

（3）检测：取（1）的样品溶液，进样2μl～100μl，记录色谱图。

在上述技术方案基础上，所述（2）中反相C18柱选自Kramosil C18（250×4.6mm，5μm）、Agilent C18（250×4.6mm，5μm）或Apollo C18（250×4.6mm，5μm），优选Agilent C18（250×4.6mm，5μm）。

在上述技术方案基础上，所述（2）中流动相A中乙腈与低浓度的醋酸水溶液的体积比为57∶42～44，优选57:43；流动相B中乙腈与低浓度的醋酸水溶液的体积比为90∶9.5～10.5，优选90:10。