[发明专利]一种改良共变性荧光原位杂交方法有效
| 申请号： | 201310381654.9 | 申请日： | 2013-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN103451287A | 公开（公告）日： | 2013-12-18 |
| 发明（设计）人： | 曾艳 | 申请（专利权）人： | 曾艳 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 浙江永鼎律师事务所 33233 | 代理人： | 王梨华;陈丽霞 |
| 地址： | 浙江省绍*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 改良 变性 荧光 原位杂交 方法 | ||
1.一种改良共变性荧光原位杂交方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤一 制备玻片标本：样品经过EDTA-胰酶消化、低渗液处理、固定液固定处理后，滴片并烘烤，制得玻片标本；
步骤二 探针与染色体共变性和杂交：在玻片标本上，滴加探针，加盖盖玻片后，封盖盖玻片与载玻片间的交界缝，烘烤玻片标本，使探针与样品染色体共变性，共变性完成后，将玻片标本置于湿盒中孵育；
步骤三 杂交后洗涤并染色：孵育完成后，取出玻片标本，移除封盖盖玻片与载玻片间交界缝的胶水，用SSC洗涤液洗涤玻片标本后，染色处理；
步骤四 信号检测：用荧光显微镜检测玻片标本。
2.根据权利要求1所述的一种改良共变性荧光原位杂交方法，其特征在于：步骤一中，低渗液为氯化钾和柠檬酸钠的水溶液，固定液为甲醇和乙酸的混合液。
3.根据权利要求1所述的一种改良共变性荧光原位杂交方法，其特征在于：步骤一中，烘烤温度为60～70℃，烘烤时间10～20分钟。
4.根据权利要求1所述的一种改良共变性荧光原位杂交方法，其特征在于：步骤二中，盖玻片与载玻片间的交界缝采用环氧胶封盖。
5.根据权利要求1所述的一种改良共变性荧光原位杂交方法，其特征在于：步骤二中，玻片标本的共变性温度为73～75℃，共变性时间为40秒～2分钟。
6.根据权利要求1所述的一种改良共变性荧光原位杂交方法，其特征在于：步骤二中，孵育温度为36～38℃，孵育时间为8～16小时。
7.根据权利要求1所述的一种改良共变性荧光原位杂交方法，其特征在于：步骤三中，SCC洗涤液为0.4×SSC溶液和2×SSC溶液，0.4×SSC溶液中含有体积分数为0.3%的NP-40，2×SSC溶液中含有体积分数为0.1%的NP-40。
8.根据权利要求7所述的一种改良共变性荧光原位杂交方法，其特征在于：步骤三中，0.4×SSC溶液经过预热处理，预热温度为73～78℃。
9.根据权利要求1所述的一种改良共变性荧光原位杂交方法，其特征在于：步骤三中，玻片标本染色采用DAPI染液。
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