[发明专利]一种绵毛胡桐内酯B的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于中药提取分离技术领域，涉及一种从南革绵毛胡桐的果实中分离制备绵毛胡桐内酯B的方法。

背景技术

绵毛胡桐内酯B的分子式：C₂₂H₂₆O₆，分子量：370.45，分子结构式为：

绵毛胡桐内酯B来源于藤黄科(Guttiferae) 南革绵毛胡桐Calophyllum lanigerum var.austrocoriaceum(T.C.Whitmore)P.F.Stevens的果实。绵毛胡桐内酯B具有抗HIV－1作用，在0.1～10μM浓度下，对HIV－1感染的细胞有100%保护作用，且能抑制HIV－1的复制，其EC50为0.4μM，IC50为15μM，治疗指数为37；选择性地抑制HIV－1逆转录酶。另有文献记载绵毛胡桐内酯对肿瘤细胞的端粒酶活性有抑制作用（李宏捷等.绵毛胡桐内酯对人口腔上皮癌KB细胞端粒酶的影响[J].《天津医药》,2008, 3: 182-184）。

目前，国内尚未见高含量绵毛胡桐内酯B的制备方法相关专利的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种绵毛胡桐内酯B的制备方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

（1）用醇类溶液对南革绵毛胡桐的果实进行提取，得到提取液；

（2）提取液浓缩，进行大孔树脂富集分离，水-乙醇洗脱，收集洗脱液；

（3）色谱柱层析：以氧化铝或硅胶为填料，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集目标洗脱液；

（4）重结晶：将绵毛胡桐内酯B洗脱液进行减压浓缩，放置析晶，滤出结晶，用丙酮重结晶，过滤、洗涤干燥即得绵毛胡桐内酯B。

所述步骤（1）中对南革绵毛胡桐的果实进行粉碎处理，控制粒径为20-40目。

所述步骤（1）中醇类溶液为80-90%乙醇水溶液，优选85%乙醇水溶液。

所述步骤（1）中对南革绵毛胡桐的果实进行连续逆流超声提取。

所述步骤（1）中固液体积比为1:8-1:15，优选1:13。

所述步骤（1）中提连续逆流超声提取的超声频率为60-80KHz。

所述步骤2）中大孔树脂可选AB-8、D101、HPD100和HZ830中一种。

所述步骤2）中洗脱剂为3-5BV水→3-5BV25-45%乙醇→5-7BV75-85%乙醇。

所述步骤（3）中石油醚-乙酸乙酯体积比为6:1-2:1。

本方法的积极效果是：

（1）本方法采用连续逆流超声提取，实现了超声提取和连续逆流提取同时进行，提取效果好，同时实现连续作业；

（2）采用连续逆流超声提取技术，溶剂消耗少，耗时短，得率高，且不会破坏有效成分的生物活性；

（3）工艺过程中使用石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，可替代通常所用的氯仿、甲醇等，安全无毒，环保；

（4）工艺步骤操作较简单，易操作，能进行大规模生产，所得产品纯度高。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

取南革绵毛胡桐的果实，经粉碎处理，控制粒径20目，称取1kg，加13倍85%乙醇溶液在45℃的温度下进行连续逆流超声提取30min，超声频率为50KHz，过滤，得到提取液，用旋转蒸发仪回收乙醇至少量，加入HPD100型大孔树脂柱层析（柱径高比1:12），依次用5BV水→5BV25%乙醇→5BV75%乙醇洗脱，收集目标洗脱液，浓缩，进行常压色谱柱层析，层析柱以氧化铝为填料，粒度为100目，石油醚-乙酸乙酯6:1、4:1、2:1梯度洗脱，收集绵毛胡桐内酯B组分，进行真空浓缩，放置析晶，滤出结晶，用丙酮重结晶，过滤、洗涤干燥即得绵毛胡桐内酯B，含量95.7%。

实施例2：