[发明专利]利用大肠杆菌原核表达系统生产的小麦蛋白质二硫键异构酶及方法和应用

权利要求书

1.利用大肠杆菌原核表达系统生产小麦蛋白质二硫键异构酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）从小麦幼叶中提取小麦总RNA，通过RT-PCR获取小麦蛋白质二硫键异构酶基因，将此基因连接到PMD-19T载体上，从T载体上克隆的目的基因经酶切后，插入到载体质粒PET-30b中，酶切位点分别为BamH I和Xho I，构建出表达蛋白质二硫键异构酶基因的质粒PET30b-wPDI；

（2）将质粒PET30b-wPDI转入大肠杆菌BL21感受态细胞中，得到重组大肠杆菌；将重组大肠杆菌接种于LB培养基中进行摇瓶培养，当菌液OD值达到0.6-0.8时，在低温条件下用0.5mM IPTG诱导6-7小时后，4℃离心收集菌体细胞；

（3）用超声破碎法冰浴裂解细胞，除去不溶性细胞碎片，收集上清液；将上清液过Ni-sepharose亲和层析柱，经梯度洗脱得到带有组氨酸标签的蛋白质二硫键异构酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）将目的基因插入到PET-30b所用的引物序列为5’-CGGATCCAGAGGAAGCCGCAGCCG-3’，5’-CCTCGAGGAGCTCGTCCTTCAGAG-3’。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述RT-PCR中所用引物序列为：5’-ATGGCGATCTGCAAGGTCTGG-3’,5’-TCAGAGCTCGTCCTTCAGAGGC-3’。

4.根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述超声破碎法冰浴裂解细胞的条件为：振幅20%，0.4s一次，每5min停止一次，共进行两次，10000rpm，4℃离心15min。

5.权利要求1或2或3或4所述方法生产的蛋白质二硫键异构酶。

6.根据权利要求5所述的蛋白质二硫键异构酶，其特征在于，所述蛋白质二硫键异构酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。

7.权利要求5所述蛋白质二硫键异构酶在面粉加工中的应用。