[发明专利]一种表达IL12的多顺反子慢病毒载体及其制备与应用

权利要求书

1.一种表达IL12蛋白的多顺反子表达载体，含有IL12蛋白表达序列，其特征在于，所述IL12蛋白表达序列含有5’至3’方向连接的IL12a基因序列，自剪切多肽2A基因序列，以及IL12b基因序列。

2.如权利要求1所述的多顺反子表达载体，其特征在于，该多顺反子表达载体由所述IL12蛋白表达序列插入到慢病毒载体获得。

3.如权利要求2所述的多顺反子表达载体，其特征在于，所述慢病毒载体为pLVTH。

4.如权利要求3所述的多顺反子表达载体，其特征在于，所述IL12蛋白表达序列插入到pLVTH载体的BamH I酶切位点和EcoR I酶切位点之间。

5.如权利要求1所述的多顺反子表达载体，其特征在于，所述IL12蛋白表达序列如SEQ ID NO：10所示。

6.权利要求1-5任一权利要求所述表达IL12蛋白的多顺反子慢病毒载体的构建方法，为采用自剪切多肽2A连接IL12的两个亚基IL12a与IL12b，构建IL12蛋白表达序列，并插入慢病毒载体获得。

7.一种表达IL12蛋白的病毒颗粒，为权利要求1-5任一权利要求所述表达IL12蛋白的多顺反子慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装而成。

8.权利要求7所述表达IL12蛋白的病毒颗粒的制备方法，步骤如下：

1）合成SEQ ID NO：10所示的IL12蛋白表达序列；

2）采用IL12蛋白表达序列替换pLVTH慢病毒载体中GFP基因，获得表达IL12蛋白的多顺反子表达载体；

3）将多顺反子表达载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下进行病毒包装，转染并培养；

4）从含有病毒颗粒的细胞培养液中分离纯化病毒颗粒。

9.一种IL12蛋白的表达系统，含有权利要求7所述表达IL12蛋白的病毒颗粒以及宿主细胞。

10.权利要求1-5任一权利要求所述表达IL12蛋白的多顺反子表达载体，权利要求7所述表达IL12蛋白的病毒颗粒，以及权利要求9所述表达系统在IL12蛋白制备中的应用。