[发明专利]一种采用睾丸酮丛毛单胞菌高效生产羟基类固醇脱氢酶的方法

说明书

技术领域

 本发明涉及一种采用睾丸酮丛毛单胞菌高效生产羟基类固醇脱氢酶的方法。

背景技术

任何植物个体，都是由植物自身的组织细胞与其体内外酶、微生物的组合体，也就是说酶及微生物本身就是植物中的一部分，其中酶在生命活动中起着非常重要的作用，酶能在常温常压下催化各种生化反应，产生多种抗生素、促生长激素，活化土壤释放大量的微量元素，能增加植物的主干根和毛细根数量，拓宽养分的输送管道，让作物合理平衡吸收养料，促进作物生长、早熟、增收、增强抗逆性、抗病性、抗旱涝等。要是没有这些酶，作物就不能生长。

我国是一个农业大国，每年由农作物病虫害造成的经济损失巨大，农作物重茬病害也是农业生产中最严重的病害之一，为了防治病虫害导致化学农药的滥用，结果病虫对化学农药的抗药性越来越强，农药的施用量越来越大，浓度越来越高，病害越来越难治，再加上有机肥料使用逐年减少，化学肥料过度使用，造成土壤板结，化学药物、激素、亚硝酸盐等有害物质严重超标，生态环境也遭到了极大破坏，环境污染也越来越严重，不但人畜中毒事件频频发生，而且也造成了农作物的抗病能力大大下降，导致作物减产，农产品的品质受到极大影响，严重削弱了我国农产品在国际市场的竞争力，随着我国农产品出口量日益增加，人民生活水平的不断提高，不论是国内还是国际市场，对农产品产质产量要求越来越严格，对绿色农产品生产提出了更高的要求。

土壤是由矿物质、有机质和微生物三大部分组成，是农作物生长发育的基础，土壤中的酶及微生物直接参与土壤中物质和能量转化，采用人为方式向土壤中增加有益酶及微生物、数量，就能够增强土壤中的酶活性，从而提高土壤肥力。

目前土壤的自毒现象比较严重，自毒现象就是指在前茬作物的残留体在腐烂分解过程中会产生一些毒素，如：醛、醇、烃类，还有积累的药物残留及甾体激素等，对下茬作物有显著的抑制作用，影响作物的自身生长，加上土壤病原微生物的大量繁殖，数量逐年上升，由于幼苗抵抗能力弱，易于染病，营养元素的亏缺或失衡，土壤营养元素呈现生理性不平衡，直接造成作物营养平衡失调，作物根部腐烂，根系不发达，影响作物的正常生理代谢，造成作物大面积减产甚至绝收。

根据以上所存在的技术问题，本发明经多年研究，成功的开发出一种新型农用酶制剂，羟基类固醇脱氢酶，根据实验结果证明，该酶对作物有显著的防病、促生、增产功能。此外，酶是一种生物催化剂，自然中一切生命现象都与酶的活动有关系，酶产品在养殖业中的应用正在进入快速发展阶段，逐渐成为畜牧养殖业新技术革命的主要方向和效益提升的关键。随着中国经济的持续快速发展，农业现代化进程的不断扩大，势必会大大增加酶产品的市场需求。本发明抓住这一机遇，发挥自身的研究优势，将羟基类固醇脱氢酶作为一种新型的饲用酶制剂应用到畜牧业的养殖方面，经多批次试验证明，该酶能有效促进猪、肉鸡的生长，提高蛋鸡产蛋率，减少畜禽疾病，促生长效果显著。

发明内容

为克服上述技术问题，本发明提供一种采用睾丸酮丛毛单胞菌高效生产羟基类固醇脱氢酶的方法，其包含如下步骤：

配制LB培养基：将10克蛋白胨，5克酵母浸粉和5克氯化钠不分前后顺序投入到1000毫升水中，PH值自然，搅拌溶解后分装于多个直径25mm，长度200mm的试管中，每个试管中装5毫升，将所述多个试管放医用消毒器中，采用0.12-0.14兆帕灭菌20分钟；

接种：在无菌条件下打开冻干管睾丸酮丛毛单胞菌种，然后向所述冻干管睾丸酮丛毛单胞菌种里面加入以上灭菌好的LB培养基1毫升，摇动溶化后制得冻干管菌悬液备用，然后取上面灭好菌的培养基5毫升，在无菌条件下打开试管，并向试管中加入所述冻干管菌悬液0.3毫升，重新将试管密封好，放摇瓶机中摇动制得扩大菌种液；

一级种子培养：

一级种子培养基配方中各组分的重量百分比为：

酵母浸粉0.15%—0.25% 蛋白胨0.25%—0.45%   氯化钠 0.1%—0.3%    

植物甾醇0.01%—0.15% 维生素D3 0.01%—0.15%  硫酸铵0.25%—0.5%

余量为水                 PH值自然