[发明专利]合成四环素偶联抗原的方法无效
| 申请号： | 201310350832.1 | 申请日： | 2013-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN103421108A | 公开（公告）日： | 2013-12-04 |
| 发明（设计）人： | 武玉香;沈志强;唐世云;林初文 | 申请（专利权）人： | 山东绿都生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/765 | 分类号： | C07K14/765 |
| 代理公司： | 济南舜源专利事务所有限公司 37205 | 代理人： | 徐槐 |
| 地址： | 256600 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 合成 四环素 抗原 方法 | ||
1.合成四环素偶联抗原的方法，包括下述的步骤：
a. 四环素的衍生化
称取四环素，加入N，N-二甲基甲酰胺溶解，得到溶液①；
称取N，N-羰基二咪唑，加入N，N-二甲基甲酰胺溶解，得到溶液②；
将溶液①缓慢滴加到溶液②中，于34-39℃下搅拌衍生1-5小时，得衍生化的四环素；
b. 四环素与蛋白偶联
称取牛血清白蛋白，加入PBS溶解，得到溶液③；
将步骤a中衍生化好的四环素缓慢滴加到溶液③中，于34-39℃搅拌反应3-8小时，然后4℃放置过夜，得偶联的四环素；
c. 偶联抗原的纯化
将步骤b中偶联好的四环素全抗原装入透析袋中，4℃下放置，用蒸馏水透析1-3天，每隔4-8小时换蒸馏水一次；
d. 偶联抗原的鉴定
采用间接Elisa方法，将纯化好的四环素偶联抗原用0.01M PBS梯度稀释，所述的稀释倍数为1：2000，1：4000，1：8000，1：16000，1：32000，1：64000包被酶标板，测定偶联抗原的活性及效价。
2.如权利要求1所述的合成四环素偶联抗原的方法，包括下述的步骤：
a. 四环素的衍生化
称取四环素2mg，加入300 μL N,N-二甲基甲酰胺溶解，得到溶液①；
称取N，N-羰基二咪唑30mg，加入300 μL N,N-二甲基甲酰胺溶解，得到溶液②；
将溶液①缓慢滴加到溶液②中，于37℃中搅拌衍生3小时；
b. 四环素与蛋白偶联
称取牛血清白蛋白10mg，加入600μL 0.01M PBS溶解，得到溶液③，将衍生化好的四环素缓慢滴加到溶液③中，于37℃搅拌反应5小时，然后4℃放置过夜；
c. 偶联抗原的纯化
将偶联好的四环素全抗原装入透析袋中，4℃放置，用500ml蒸馏水透析3天，每隔6小时换蒸馏水一次；
d. 偶联抗原的鉴定
用间接Elisa方法，将纯化好的四环素偶联抗原用0.01M PBS梯度稀释，所述的稀释倍数为1:2000,1:4000，1:8000，1:16000，1:32000，1:64000包被酶标板，测定偶联抗原的活性及效价。
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