[发明专利]一种水稻开花素重组蛋白的制备方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种水稻开花素重组蛋白的制备方法。

（二）背景技术

开花是绿色植物特有的现象，开花植物使得世界绚丽多彩。多年来，科学家一直在对植物开花机理进行不懈的探索，并希望对植物开花的周期进行调控。1937年，俄国植物生理学家Mikhail Chailakhyan提出开花素（Florigen）假说，认为植物叶片接收到光信号后会产生某种物质并传递到植物茎顶端诱导花芽产生。利用嫁接等研究方法也进一步发现植物叶子可以通过感受日昼长短变化来感受季节变化，并因此而产生某种物质，引发一种从叶到茎尖的长距离信号传导，最终促进开花。这种可能的物质被称为开花素，但是几十年来开花素的化学本质一直没有被鉴定。最近几年在拟南芥（Arabidopsis thaliana）和水稻（Oriza sativa）中同时发现了开花素，它是一种可移动的蛋白分子，参与花器官形成的诱导。在拟南芥中开花素是由叶片中Flowering Locus T（FT）基因编码的FT蛋白，可通过维管系统运送至茎尖，激活其它开花相关基因并引起开花。水稻中的FT同源蛋白是OsHd3a，能从叶中传递到茎尖分生组织从而导致水稻开花。在番茄（Solanum lycopersicum）中也存在FT同源基因SINGLE-FLOWER TRUSS（SFT），在烟草（Nicotiana tabacum）或番茄中过量表达FT或SFT基因都会促进提前开花。

开花素相关的研究结果给我们利用开花的分子机制对植物开花进行调控提供了重要启示，开花素既然是叶片中产生并可以移动的蛋白，那么就可以通过人工的方法生产开花素蛋白并施用于植物，如果可以应用于农作物、花卉观赏园艺等植物进行开花周期的调控，那么具有巨大的应用前景和商业价值。植物的开花年限，既是科学家研究的热点也是实践生产中需要解决的问题。

（三）发明内容

本发明目的是提供一种水稻开花素重组蛋白的制备方法。

本发明采用的技术方案是：

一种水稻开花素重组蛋白的制备方法，所述方法包括：

（1）取开花期水稻叶片，用液氮研磨后，按常规方法提取总RNA；

（2）以水稻总RNA为模板，用扩增引物进行RT-PCR，PCR产物经电泳后凝胶回收，回收产物克隆至pMD18-T，获得重组载体pMD18-T-OsHd3a；

所述扩增引物序列如下：

上游引物：5'-CATATGGCCGGAAGTGGCAGGGACAG-3'；

下游引物：5'-GGGGTAGACCCTCCTGCCGCCCTCGAG-3'；

扩增得到的核苷酸序列如下：

ATGGCCGGAAGTGGCAGGGACAGGGACCCTCTTGTGGTT GGTAGGGTTGTGGGTGATGTGCTGGACGCGTTCGTCCGGA GCACCAACCTCAAGGTCACCTATGGCTCCAAGACCGTGTC CAATGGCTGCGAGCTCAAGCCGTCCATGGTCACCCACCAG CCTAGGGTCGAGGTCGGCGGCAATGACATGAGGACATTCT ACACCCTTGTGATGGTAGACCCAGATGCACCAAGCCCAAG TGACCCTAACCTTAGGGAGTATCTACATTGGTTGGTCACTG ATATTCCTGGTACTACTGCAGCGTCATTTGGGCAAGAGGTG ATGTGCTACGAGAGCCCAAGGCCAACCATGGGGATCCACC GGCTGGTGTTCGTGCTGTTCCAGCAGCTGGGGCGTCAGAC AGTGTACGCGCCCGGGTGGCGTCAGAACTTCAACACCAA GGACTTCGCCGAGCTCTACAACCTCGGCTCGCCGGTCGCC GCCGTCTACTTCAACTGCCAGCGCGAGGCAGGCTCCGGCG GCAGGAGGGTCTACCCCTAG；

其编码的氨基酸序列如下：