[发明专利]一种水稻开花素重组蛋白的制备方法无效
| 申请号： | 201310346525.6 | 申请日： | 2013-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN103436551A | 公开（公告）日： | 2013-12-11 |
| 发明（设计）人： | 朱廷恒;王渭霞;严宏波;汪琨;崔志峰 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;冷红梅 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 水稻 开花 重组 蛋白 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种水稻开花素重组蛋白的制备方法，所述方法包括：
（1）取开花期水稻叶片，用液氮研磨后，提取总RNA；
（2）以水稻总RNA为模板，用扩增引物进行RT-PCR，PCR产物经电泳后凝胶回收，回收产物克隆至pMD18-T，获得重组载体pMD18-T-OsHd3a；
所述扩增引物序列如下：
上游引物：5'-CATATGGCCGGAAGTGGCAGGGACAG-3'；
下游引物：5'-GGGGTAGACCCTCCTGCCGCCCTCGAG-3'；
（3）测序正确的重组载体pMD18-T-OsHd3a经限制性内切酶NdeI/XhoI酶切后，将含目的基因片段插入pET28b，构建重组表达载体pET28b-OsHd3a，经过测序验证后转入大肠杆菌菌株BL21（DE3）；
（4）含重组质粒的表达菌株BL21（DE3）在37℃活化培养后，挑取单菌落转入LB液体培养基中37℃振荡培养12h，所得菌液按照1:100体积比加入到含卡那霉素50μg/m L的LB液体培养基中，37℃、200r/min培养至OD600为0.4，加入终浓度0.50mmol/L的IPTG，20℃诱导培养至OD600为1.0；
（5）步骤（4）所得菌液经分离纯化，得到所述水稻开花素重组蛋白。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（4）诱导培养时培养基中还添加有2g/L的葡萄糖。
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