[发明专利]双特异性抗体

说明书

技术领域

本发明涉及双特异性抗体，还涉及所述双特异性抗体的免疫偶联体、制备方法和含有所述偶联体的药物组合物及其用途。

技术背景

双特异性抗体(BsAb)或双特异性单克隆抗体(BsMAb)是由两种不同的抗体片段构成的一种人工蛋白质。由于包含两种不同的抗原结合域，一个双特异性抗体能够识别和结合两个不同的抗原或两个不同的抗原表位。在肿瘤免疫治疗中，双特异性抗体能够同时结合肿瘤细胞表面受体和细胞毒性细胞表面的受体，如CD3，将细胞毒性细胞靶向到肿瘤细胞，进而杀伤肿瘤细胞。

双特异性抗体在各方面都面临着挑战。首先，他们难以工业化生产。更重要的是，这类人工蛋白质在体外和体内的稳定性通常不高。当一个蛋白质中具有两个空间上非常接近的抗原结合域，这两个抗原结合域能否保留彼此的结合活性是最需要关注的一个问题。

为了克服工业化生产困难，第一代双特异性单克隆抗体，也被叫做三功能性抗体，已经开发出来了。它是由两条重链和两条轻链组成，每条重链和轻链都来自于两个不同的抗体。两个Fab区域靶向两个抗原。Fc区域则是由这两条重链共同组成，形成第三个结合位点，因此得名三功能性抗体。

其他类型的双特异性抗体也已被设计出来用于解决某些特定问题，例如半衰期短、免疫原性和细胞因子释放引起的副作用。这些方法包括只有Fab区域的化学偶联Fabs，以及各种类型的二价和三价的单链式可变区片段(scFvs)，模拟两个抗体可变区结构域的融合蛋白。

在过去的一段时间内，其他类型的重组抗体形式也一直在发展,例如通过融合一个IgG抗体和单链结构域而形成的四价双特异性抗体(参见Coloma,M.J.等,Nature Biotech 15(1997)159-163；WO 2001/077342和Morrison,S.L.,Nature Biotech 25(2007)1233-1234)。

同时其他几种新的形式也被开发出来，其中抗体核心结构(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)不再保留，如二价、三价或四价抗体，小分子抗体，单链形式抗体(scFv，Bis-scFv)，它们都能够绑定两个或更多的抗原(Holliger,P.等,Nature Biotech 23(2005)1126-1136；Fischer,N.,Leger,O.,Pathobiology 74(2007)3-14；Shen,J.等,Journal of Immunological Methods 318(2007)65-74；Wu,C.等,Nature Biotech.25(2007)1290-1297)。

所有这些形式都是使用连接子来融合抗体核心部分(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)和另一个结合蛋白(如scFv)，例如融合两个Fab片段，或者scFvs(Fischer,N.,Leger,O.,Pathobiology 74(2007)3-14)。其中通过维持与天然抗体的高相似性来保留抗体效应功能是非常重要的，比如补体依赖细胞毒性(CDC)或抗体依赖细胞的细胞毒性(ADCC)，这些都是通过Fc受体结合介导的。

专利WO2007/024715报道了双可变结构域免疫球蛋白，该蛋白为多价和多特异性结合蛋白。美国专利6897044报道用于制备具有生物活性的抗体二聚体的方法。美国专利7129330报道至少具有四个通过肽连接子连接的可变结构域的多价F.sub.v抗体。在专利US 2005/0079170中报告二聚体和多聚体的抗原结合结构。美国专利6511663报道了三或四价单特异性抗原结合蛋白，其包括3个或4个通过共价键连接的Fab片段，该蛋白不是天然的免疫球蛋白。专利WO2006/020258报道了可以在原核和真核细胞中高效表达的四价双特异性抗体，用于治疗和诊断。专利US 2005/0163782报道了从两种类型的多肽二聚体的混合物中分离或选择性地合成至少由一个链间二硫键连接的二聚体和不是至少由一个链间二硫键连接二聚体的方法。美国专利5959083报告了四价双特异性受体。专利WO2001/077342中报道了具有三个或更多抗原结合位点官能团的工程抗体。