[发明专利]一种用于检测t(8;21)AML中目的基因拷贝数改变的探针试剂盒

权利要求书

1.一种即用型杂交液，其特征在于：该即用型杂交液的组分及浓度为：AML1基因探针、ETO基因探针、WT1基因探针、P27基因探针和C-kit基因探针的浓度均为4ng/μl。

2.权利要求1所述即用型杂交液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)、探针制作：在常用的数据库如NCBI Clone Registry、Ensembl Genome Browser和UCSC Genome Bioinformatics上定位检索分别含检测AML1、ETO、WT1、P27、C-kit基因的BAC(Bacterial artificial chromosomes)克隆，获得目的基因的克隆后，大量提取质粒DNA，再采用缺口平移的方法将荧光素染料标记的dUTP或dCTP连接到酶切好的DNA上，对标记好的目的DNA进行组合沉淀，用含有50%去离子甲酰胺的杂交缓冲液溶解沉淀，制得即用型杂交液；

2)、探针验证：采用正常人二倍体成纤维细胞的细胞爬片进行探针验证。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述含AML1基因最优的克隆，编号为：RP11-77G18,RP11-697C13和RP11-177L11的组合;所述含ETO基因最优的克隆，编号为：RP11-118O8和RP11-122C21的组合；所述含WT1基因最优的克隆，编号为：RP11-258G7和RP11-955L20的组合；所述含p27基因最优的克隆，编号为：RP11-380E18,RP11-70N14和RP11-377D9的组合；所述含c-kit基因最优的克隆，编号为：RP11-103A16和RP11-178P22的组合。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述的步骤1)为在常用的数据库如NCBI Clone Registry、Ensembl Genome Browser和UCSC Genome Bioinformatics上定位检索分别含检测AML1、ETO、WT1、P27、C-kit基因的BAC(Bacterial artificial chromosomes)克隆，获得目的基因的克隆后，大量提取质粒DNA，再采用缺口平移的方法将荧光素染料标记的dUTP或dCTP连接到酶切好的DNA上，用100%的乙醇将连接好的DNA在-20℃进行组合沉淀过夜，次日离心14000rpm，4℃，20分钟，用枪尖小心吸弃上清，加入70%乙醇（4℃），混匀，离心14000rpm，4℃，15分钟，用枪尖小心吸弃上清，室温避光干燥沉淀10分钟，用含有50%去离子甲酰胺的杂交缓冲液溶解沉淀，制得即用型杂交液。

5.一种检测t(8;21)AML中目的基因拷贝数改变的探针试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述即用型杂交液。

6.根据权利要求5所述的探针试剂盒，其特征在于：该检测试剂盒还包括：12*12mm盖玻片，18*18mm盖玻片，载玻片，DAPI复染剂和液体橡胶。