[发明专利]牛源性抗金黄色葡萄球菌单链抗体及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201310337959.X | 申请日： | 2013-08-05 |
| 公开（公告）号： | CN103570831A | 公开（公告）日： | 2014-02-12 |
| 发明（设计）人： | 朱建国;王曼;李本强;张艳玲 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C07K16/12 | 分类号： | C07K16/12;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/40;A61P31/04;G01N33/569;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海新天专利代理有限公司 31213 | 代理人： | 张泽纯 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 牛源性抗 金黄色 葡萄球菌 抗体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种牛源性抗金黄色葡萄球菌单链抗体，其至少具有如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的轻链可变区、如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的重链可变区和位于轻链可变区与重链可变区之间的中间连接肽。
2.根据权力要求1所述的一种牛源性抗金黄色葡萄球菌单链抗体，其特征在于：所述的中间连接肽为GGAAGATCTAGAGGACTGACC。
3.根据权力要求1所述的一种牛源性抗金黄色葡萄球菌单链抗体，其特征在于：所述的单链抗体具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列。
4.一种编码如权力要求1所述单链抗体的基因，其具有SEQ ID No.4所示的核苷酸序列。
5.根据权力要求4所述的基因，其特征在于：所述核苷酸序列中进一步包括内切酶位点NotI、NcoI和识别序列，其中NcoI：CCATGG，NotI：GCGGCCGC。
6.一种含有如权力要求3或4所述基因的表达载体。
7.根据权力要求6所述的表达载体，其特征在于：所述的表达载体为原核表达载体。
8.根据权力要求7所述的表达载体，其特征在于：所述的表达载体为pOPE101-XP载体。
9.一种由权力要求6所述表达载体转化的宿主细胞。
10.根据权力要求9所述的宿主细胞，其特征在于：所述的宿主细胞为JM109细胞。
11.一种牛源性抗金黄色葡萄球菌单链抗体的制备方法，包括以下步骤：
（1）采用RT-PCR直接从患奶牛乳腺炎的外周血单个核细胞RNA中扩增出抗体编码基因的重链可变区基因VH和轻链可变区VL基因；
（2）利用SOE-PCR法将linker与VH基因和VL基因相连构建牛源性单链抗体基因；
（3）将步骤（2）的牛源性单链抗体基因克隆到原核表达载体pOPE101-XP中，构建重组质粒；
（4）将步骤（3）的原核表达载体pOPE101-XP转化入大肠杆菌，培养、表达单链抗体；
（5）分离纯化步骤（4）所得培养产物即获得所述牛源性抗奶牛乳腺炎的单链抗体。
12.一种牛源性抗金黄色葡萄球菌单链抗体在制备治疗奶牛乳腺炎药物、或奶牛乳腺炎的诊断试剂和诊断试剂盒中的应用。
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