[发明专利]同色兜兰的杂交育种及其种苗繁殖方法

权利要求书

1.同色兜兰的杂交育种及其种苗繁殖方法，其特征在于包括以下步骤:

（1）人工授粉：将不同种类的野生兜兰植株引种种植在人工资源圃中，选同色兜兰作为亲本之一，与其它兜兰属植物互为父、母本进行杂交，在花朵开放4~10天，花粉块开始由硬变软时，采集父本的花粉人工授于母本的柱头上，两个亲本互为父、母本进行正反交,并进行套袋处理，防止外来花粉的干扰，5天后去除套袋；

（2）种子成熟度的选择：选择人工授粉后生长150~180天，蒴果充分膨大，果皮由浓绿开始转黄时的果实种子为最佳材料；

（3）种子萌发形成原球茎：当杂交果实发育到150~180天时，整果剪下先用自来水清洗干净，然后依次用体积分数为70~75%酒精溶液浸泡1~2分钟后，用质量分数为0.1~0.2%的升汞溶液浸泡消毒15~20分钟，再用无菌水冲洗4~5次，用无菌滤纸吸干果实表面的水分，纵向切开果实，将种子接种到萌发培养基上，在温度25~28℃的黑暗条件培养，培养20天时种子开始膨大形成无色透明的或白色的原球茎，30~50天达到萌发高峰；所述种子萌发培养基含： 1/2~1/6MS、BA1.0~2.0 mg L^-1、NAA0.1~1.0 mg L^-1、椰子汁100~200 ml L^-1、活性炭1.0~2.0 g L^-1、蔗糖20~30 g L^-1、琼脂4.5~5.5 g L^-1、pH为5.0~5.5；

（4）原球茎分化形成幼苗：将种子萌发形成的原球茎及时转入幼苗分化培养基中，在温度25~28℃、光照强度30 μmol·m^-2·s^-1、光照时间12 h d^-1的条件下培养，培养20~30天，原球茎分化形成具两片叶子的小苗；所述幼苗分化培养基含：1/4MS、BA0.8~1.2 mg L^-1或KT0.5~1.0 mg L^-1、NAA0.1~0.5 mg L^-1、椰子汁100~200 ml L^-1、活性炭0.5~1.0 g L^-1、蔗糖20~30 g L^-1、琼脂4.5~5.5 g L^-1、pH为5.0~5.5； 

（5）壮苗培养：将原球茎分化形成的小苗转接到壮苗培养基上培养，在温度25~28℃、光照强度30μmol·m^-2·s^-1、光照时间12 h d^-1的条件下，培养30~50天形成健壮的植株；所述壮苗培养基含：MS、NAA0.5~2.0 mg L^-1、马铃薯汁150~250 g L^-1、活性炭1.0~2.0 g L^-1、蔗糖20~30 g L^-1、琼脂4.5~5.5 g L^-1、pH为5.0~5.5；

（6）试管苗移栽：将根系生长良好、株高达5cm的植株转移到自然光下练苗7~10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入园土：树皮体积比为1：1~1：2的混合基质中培养。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：步骤（3）中所述种子萌发培养基含：1/4MS、BA2.0 mg L^-1、NAA0.5 mg L^-1、椰子汁200 ml L^-1、活性炭1.0g L^-1、蔗糖20 g L^-1、琼脂4.5 g L^-1、pH为5.5。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：步骤（4）中所述幼苗分化培养基含：1/4MS、KT1.0 mg L^-1、NAA0.5 mg L^-1、椰子汁150 ml L^-1、活性炭0.5 g L^-1、蔗糖20 g L^-1、琼脂4.5 g L^-1、pH为5.2。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是：步骤（5）中所述壮苗培养基含：MS、NAA0.5 mg L^-1、马铃薯汁200 g L^-1、活性炭1.0 g L^-1、蔗糖20 g L^-1、琼脂4.5 g L^-1、pH为5.5。