[发明专利]一种吐根药材及制剂中生物碱的高效液相(HPLC)定量测定方法

说明书

技术领域

本发明属于药物质量控制技术领域，特别涉及一种吐根药材及制剂中生物碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法。

背景技术

吐根为茜草科植物Cephaelis ipecacuanha(Brot.)A.Rich.或Cephaelis acuminate Karsten的干燥根茎，原产于巴西，在其他热带气候地区也有栽培；具有止咳化痰、催吐、抗阿米巴病等功效；有研究表明其主要药理活性成分为生物碱类化学成分。目前吐根药材、吐根粉和吐根糖浆的质量标准在美国药典、日本药典和欧洲药典均有收载。各国药典中多以盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的含量做为吐根药材及其制剂的主要质量评价指标，其中在美国药典及欧洲药典中主要是采用示差折光光度法检测盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的含量、采用酸碱滴定的方法测定总生物碱的含量；日本药典(JP16)则采用了高效液相色谱法检测盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的含量。也有一些文献报道采用HPLC色谱法、实时直接分析-串联质谱(DART-MS/MS)检测吐根中生物碱，但是这些方法均存在一些不足之处；如美国药典和欧洲药典所述方法操作繁琐，准确度和重复性差；JP药典和一些文献报道的HPLC色谱法采用284nm检测波长，导致方法的灵敏度降低，同时检测耗时较长，前处理繁琐；中国专利201210131906.8中供试品溶液的制备需要用到中性氧化铝柱，操作繁琐，重复性差；实时直接分析-串联质谱(DART-MS/MS)法设备昂贵，不利用推广应用。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种吐根药材及制剂中盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法，所述方法具有样品前处理简单，样品检测时间短、重复性好、准确度高等优点。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种吐根药材及制剂中生物碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法，测定方法包括以下步骤：

①对照品溶液的制备

取盐酸吐根碱适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成每1ml含盐酸吐根碱50μg的溶液，即得盐酸吐根碱对照品溶液；

取盐酸吐根酚碱适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成每1ml含盐酸吐根碱50μg的溶液，即得盐酸吐根酚碱对照品溶液；

②供试品溶液的制备

称取吐根粉末约0.25g，精密称定，置于100ml容量瓶中，加60％甲醇35ml及盐酸1滴，密塞，静置浸润30分钟后，超声处理50min，放冷后，加甲醇定容至刻度；或精密量取吐根流浸膏0.25ml或吐根酊5ml置棕色容量瓶中，加60％甲醇水溶液溶解并定容至100ml；上述定容后溶液离心后取上清即得供试品溶液；

③色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈和0.1％磷酸水溶液组成的混合溶剂，乙腈和0.1％磷酸水溶液体积比为10～15∶85～90；流速：0.5～1.5mg/ml；检测波长：200～210nm；理论塔板数按盐酸吐根碱及盐酸吐根酚碱计算均应不低于3000；

④测定法

分别取上述对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，进样量为5～20μl。

本发明一种吐根药材及制剂中生物碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法，所述的色谱柱优选C18色谱柱，可以选择岛津Shim-pack VP-ODS C18(150mm×4.6mm，5μm)、Kromasil C18、Agilent ZORBEX SB-C18等反相色谱柱等，其中优选Agilent ZORBEX SB-C18反相色谱柱。

所述Agilent ZORBEX SB-C18反相色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm，其中250mm是色谱柱的长度，4.6mm是色谱柱的内径，5μm是内部填充颗粒的直径，所述Agilent ZORBEX SB-C18反相色谱柱稳定性。

所述的流动相为乙腈和0.1％磷酸水溶液组成的混合溶剂，乙腈和0.1％磷酸水溶液体积比为10～15∶85～90；其中优选为12～14∶86～88；进一步优选为12∶88。