[发明专利]一种大菱鲆致病菌株及其应用

权利要求书

1.一种大菱鲆致病菌株，为鳗弧菌（Vibrio anguillarum），其保藏编号为 CGMCC NO.7733。 

2.权利要求1所述的鳗弧菌用于制备灭活疫苗。

3.一种灭活疫苗，所述的灭活疫苗是由权利要求1所述的鳗弧菌制备的。

4.如权利要求2所述的灭活疫苗，其特征在于，除灭活的鳗弧菌外，还包括有灭活的副溶血弧菌。

5.如权利要求4所述的灭活疫苗，其特征在于灭活疫苗中灭活的鳗弧菌和灭活的副溶血弧菌的浓度分别为10⁷-10¹⁰ CFU/ml。

6.权利要求4或5所述的疫苗用于预防大菱鲆烂边病。

7.权利要求4所述的灭活疫苗的制备方法，其步骤如下：

首先，将鳗弧菌接种于含有3%NaCl的LB液体培养基中，再将副溶血弧菌株接种于含有3%NaCl的LB液体培养基中，28?C震荡培养12-16小时，待菌液浓度达10⁹CFU/ml或分光光度计检测OD600达到0.6以上时终止培养，获得菌株的扩大培养液；

然后，对鳗弧菌和副溶血弧菌的扩大培养液进行灭菌处理，按体积比0.5%将鳗弧菌和/或副溶血弧菌的扩大培养液加入甲醛溶液，室温灭活24-48小时，期间震荡5-10次，每次10-15分钟，得到菌株的灭活菌液；

最后，将菌株的灭活菌液于8000g、4?C离心15分钟，弃上清液，将沉淀用灭菌磷酸盐缓冲液PBS洗涤3次，收集菌体，灭菌PBS重悬菌液，再鳗弧菌和副溶血弧菌液混合，将混合菌液涂布于高盐营养琼脂平板，24-48小时候未见菌落长出，即制得灭活疫苗，存放于4?C备用。