[发明专利]用于庆大霉素定量检测的荧光二氧化硅标记的免疫层析试纸及制备方法

权利要求书

1.一种用于庆大霉素定量检测的荧光二氧化硅标记的免疫层析试纸，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为吸附纤维层、荧光抗体纤维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其特征在于：在纤维素膜层上设有用偶联庆大霉素的载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹，以及用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液或金黄色葡萄球菌蛋白A溶液印制的隐形对照印迹；所述荧光抗体纤维层采用吸附荧光抗体的玻璃纤维棉制成，荧光抗体采用荧光二氧化硅纳米颗粒标记的庆大霉素抗体制成。

2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于：所述荧光二氧化硅纳米颗粒的粒径为50-100nm。

3.根据权利要求2所述的免疫层析试纸，其特征在于：所述荧光二氧化硅纳米颗粒标记的庆大霉素抗体是以下方法制备的：

将1g二氧化硅纳米颗粒分散在甲苯溶液中，加入0.3-1mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流12-24h；回流液冷却后6500rpm离心5-10min，将得到的沉淀用无水乙醇洗涤，再将沉淀分散在无水乙醇中，得到氨基化的二氧化硅纳米颗粒；

将庆大霉素抗体置于2-8℃、浓度0.025-0.05mol/L、pH9.5的CBS缓冲液中，透析8-12h；将氨基化的荧光二氧化硅纳米颗粒10000-13000rpm离心4-8min，用所述CBS缓冲液洗涤，然后与透析后的庆大霉素抗体混合均匀，于2-8℃反应过夜，得到荧光二氧化硅的抗体复合物；向所得的抗体复合物中按1：50-120的体积比加入0.5mol/L的氰基硼氢化钠溶液，混匀，2-8℃反应8-12h；用质量浓度为2%的BSA溶液封闭过夜，10000-13000rpm离心4-8min，得沉淀；将沉淀用0.5mL浓度0.01-0.02mol/L、pH7.8的Tris-HCL缓冲液洗涤，得到所述的荧光二氧化硅纳米颗粒标记的庆大霉素抗体，于4℃保存，备用。

4.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征是：所述吸附纤维层用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；吸水材料层用吸水滤纸，支撑层用不吸水的韧性材料制成；纤维素膜层用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；                                                偶联庆大霉素的载体蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白或血蓝蛋白。

5.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征是：所述隐形检测印迹和隐形对照印迹为平行排列的“︱︱”直线式印迹、“十十”字型排列印迹、“┬ ┬”字型排列印迹、“┴ ┴”字型排列印迹、“├├”字型排列印迹或“┤┤”字型排列印迹。

6.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征是：所述保护层为覆盖在吸附纤维层、荧光抗体纤维层及吸水材料层上的保护膜；在吸附纤维层与荧光抗体纤维层交界处对应的保护膜上印制有样品标记线，该样品标记线偏向吸附纤维层一侧0.3-0.7cm。

7.根据权利要求1-6任一项所述的免疫层析试纸，其特征在于：所述荧光二氧化硅纳米颗粒采用以下方法制备：

将47mmol氨丙基三乙氧基硅、7.1 mmol BHHCT及3.55mmol EuCl₃?6H₂O加入30μL环己烷中，超声振荡反应15分钟后，反应液加入到含有1.1 mL水、4.74 g Triton X-100、3.64 g正辛醇及14.50 g环己烷的W/O型微乳液中，搅拌0.5小时后，加入200 μL的四乙氧基硅烷和200 μL的浓氨水，室温搅拌反应24小时后，加入40 mL丙酮结束反应，将反应液离心后除去上清液，沉淀部分用乙醇和双蒸水分别洗三次，得到所述的荧光二氧化硅纳米颗粒，悬浮于水中备用。