[发明专利]支原体核酸恒温扩增方法

权利要求书

1.一种非诊断且非治疗性的支原体的扩增方法，其特征在于，所述扩增方法包括步骤：在反应体系中进行扩增，所述的反应体系中含有扩增支原体的特异性引物对，所述引物对包括：

T7引物：序列如SEQ ID NO:3所示；和

nT7引物：序列如SEQ ID NO:4所示；

且所述反应体系还包括待测支原体的特异性检测探针，所述检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:13所示；所述反应体系还包括待测支原体的特异性捕获探针，所述捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的支原体是生殖支原体MG和/或肺炎支原体MP。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的捕获探针可与肺炎支原体MP的靶标核酸MP RNA序列特异结合。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的捕获探针可与生殖支原体MG的靶标核酸MG RNA序列特异结合。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：在另一对照反应体系中进行扩增反应。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的对照反应体系中含有所述特异性引物对、MP内标MP IC RNA、捕获探针和检测探针，所述引物对包括：T7引物：序列如SEQ ID NO:3所示；和nT7引物：序列如SEQ ID NO:4所示；

所述的MP IC RNA，序列如SEQ ID NO:14所示；

所述捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的对照反应体系中含有所述特异性引物对、MG内标MG IC RNA、捕获探针和检测探针，所述引物对包括：T7引物：序列如SEQ ID NO:3所示；和nT7引物：序列如SEQ ID NO:4所示；

所述的MG IC RNA，序列如SEQ ID NO:7所示；

所述捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

8.如权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤：在扩增反应过程之中或之后，检测待测支原体的特异性检测探针发出的荧光信号。

9.一种支原体的非诊断性检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：

用如权利要求1中所述的扩增方法扩增待测样品；和

在扩增反应过程之中或之后，检测待测支原体的特异性探针发出的荧光信号。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法还包括设置一个或多个对照组。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述对照组包括：阳性对照组、阴性对照组、内标对照组。

12.一种支原体的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

(a)第一容器，以及位于所述容器内的扩增生殖支原体MG和/或肺炎支原体MP的特异性引物对，所述引物对包括：

T7引物：序列如SEQ ID NO:3所示；和

nT7引物：序列如SEQ ID NO:4所示；

以及使用说明书；

且所述检测试剂盒中还包括待测支原体的特异性检测探针，所述检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:13所示，其中SEQ ID NO:5为MG的检测探针，SEQ ID NO:13为MP的检测探针；所述反应体系还包括待测支原体的特异性捕获探针，所述捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

13.如权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，还含有选自下组的一种或多种组分：

(b)待测序列的内标序列；和/或

(c)内标检测探针。

14.如权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括一种或多种酶。

15.如权利要求14所述的试剂盒，其特征在于，所述的酶是M-MLV反转录酶和T7RNA聚合酶。