[发明专利]亚洲玉米螟OfGSTe1基因及其编码蛋白和OfGSTe1基因RNAi干扰菌株构建

权利要求书

1.亚洲玉米螟OfGSTe1基因，其特征在于亚洲玉米螟OfGSTe1基因的核苷酸序列如序列表SeqIDNo：1所示。

2.根据权利要求1所述的亚洲玉米螟OfGSTe1基因，其特征在于所述的亚洲玉米螟OfGSTe1基因的RNAi干扰DNA片段的核苷酸序列如序列表SeqIDNo：2所示。

3.亚洲玉米螟OfGSTe1基因编码的蛋白，其特征在于亚洲玉米螟OfGSTe1基因编码蛋白的氨基酸序列如序列表SeqIDNo：3所示。

4.亚洲玉米螟OfGSTe1基因RNAi干扰菌株的构建，其特征在于它的构建方法如下：

一、OfGSTe1基因克隆

以由亚洲玉米螟三龄幼虫总RNA反转录而成的cDNA为模板，通过如下引物，进行PCR扩增：

P1，5’-CAAAATCGACGCCAGCC-3’；

P2，5’-TGTCCCAACAGTTGTGCG-3’；

回收纯化PCR产物，即得OfGSTe1基因；

二、OfGSTe1基因RNAi干扰载体的构建

以步骤一得到的OfGSTe1基因为模板，通过以下引物，进行PCR扩增：

RNAiE1-P1：5’-TCGCTGCAGTCGAGGCAATGTGTATTCAGT-3’；

RNAiE1-P2：5’-GACAAGCTTTGTCCCAACAGTTGTGCG-3’；

纯化回收PCR产物，利用PstⅠ和HindⅢ对回收后的PCR产物和L4440载体进行双酶切，连接并构建RNAi干扰载体L4440-OfGSTe1；

三、OfGSTe1基因RNAi干扰菌株的构建

将步骤二构建出的RNAi干扰载体L4440-OfGSTe1导入大肠杆菌HT115中，即完成亚洲玉米螟OfGSTe1基因RNAi干扰菌株构建。

5.根据权利要求4所述的亚洲玉米螟OfGSTe1基因RNAi干扰菌株的构建，其特征在于步骤一中所述的PCR反应条件如下：

PCR反应体系为：

PCR程序如下：94℃预变性10min，94℃变性1min，55.8℃退火1min，72℃延伸30s，共35个循环，再72℃延伸10min，4℃保存。