[发明专利]一种脱二氧喹烯酮半抗原及其制备方法和其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种脱二氧喹烯酮半抗原及其制备方法和其应用。

背景技术

喹烯酮(Quinocetone)分子式C₁₈H₁₄N₂O₃，属喹噁啉类药物，是中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所研制的畜禽抗菌、止泻、促生长新药，是我国在国际上首创的一类新兽药。该类药物对多种肠道致病菌（特别是革兰氏阴性菌）有抑制作用，可明显降低畜禽腹泻发生率，促进生长并提高饲料转化率。目前包括我国在内的许多国家和地区都广泛用作动物饲料添加剂。喹烯酮在畜牧业上广泛使用的同时，由于畜牧业生产者不熟悉药物的理化性质和药理毒理特点，存在一定的滥用情况，导致畜产品中喹烯酮及其主要代谢产物脱二氧喹烯酮残留超标，对人们的身体健康造成严重的潜在危胁。同时由于动物性产品具有不易储存、易变质等特点，为了保障消费者的身体健康，迫切需要建立一种快速、简便、价廉、灵敏、特异的喹烯酮及其主要代谢产物脱二氧喹烯酮的筛选方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种脱二氧喹烯酮半抗原及其制备方法和其应用。

本发明提供的脱二氧喹烯酮半抗原具有式Ⅰ所示的化学结构：

本发明提供的脱二氧喹烯酮半抗原的制备方法，包括下述步骤（1）和（2）：

（1）将乙酰甲喹和低亚硫酸钠于60℃反应2小时，即得3-甲基-2-乙酰喹噁啉；所述乙酰甲喹和低亚硫酸钠的摩尔比为1:1.8；

（2）将3-甲基-2-乙酰喹噁啉和对甲酰苯甲酸在碱催化剂作用下，于40℃反应12h，再室温反应过夜，即得脱二氧喹烯酮半抗原；所述3-甲基-2-乙酰喹噁啉和对甲酰苯甲酸的摩尔比为1:1.2。

所述步骤（1）中，需要先将乙酰甲喹在所述溶剂中溶解，再加入低亚硫酸钠。

所述溶解为加热溶解；具体为30℃加热溶解。

所述步骤（2）中，所述室温具体为25-27℃；所述反应过夜具体为反应12-14小时。

所述步骤（1）中，所述反应在溶剂中进行，所述溶剂为四氢呋喃、100%乙醇和蒸馏水的混合溶剂，所述四氢呋喃、100%乙醇和蒸馏水的体积比为2:10:1；所述步骤（2）中，所述反应在溶剂中进行，所述溶剂为四氢呋喃、乙醇和水的混合物；所述步骤（2）中，所述碱催化剂为氢氧化钠。

所述步骤（1）中，所述反应完毕后还包括浓缩过程和纯化过程。

所述浓缩过程具体为于0.1MP、50℃条件下旋转蒸发移除所述溶剂。

所述纯化过程具体为用蒸馏水和三氯甲烷萃取，干燥合并的有机相，移除溶剂即得。

所述纯化过程中，所述蒸馏水和三氯甲烷的体积比为4：9；所述萃取具体为3次；所述干燥具体为用无水硫酸钠干燥。

所述步骤（2）中，所述反应完毕后还包括纯化过程。

所述纯化过程具体为过滤、产物依次用热乙醇和热丙酮清洗、干燥即得。

所述纯化过程中，所述热乙醇和热丙酮指35℃的乙醇和丙酮；所述热乙醇和热丙酮的体积数分各为50ml；所述清洗具体为清洗3次；所述干燥具体为用无水硫酸钠干燥。

本发明提供的脱二氧喹烯酮半抗原或由所述方法直接得到的脱二氧喹烯酮半抗原作为半抗原的用途。

所述用途中，所述作为半抗原的用途具体指用所述半抗原偶联蛋白后免疫动物，可获得针对喹烯酮代谢产物的特异性抗体；所述喹烯酮代谢产物具体指脱二氧喹烯酮。

本发明提供的脱二氧喹烯酮半抗原或由所述方法直接得到的脱二氧喹烯酮半抗原在检测脱二氧喹烯酮中的用途。

本发明提供的脱二氧喹烯酮半抗原或由所述方法直接得到的脱二氧喹烯酮半抗原在制备检测脱二氧喹烯酮产品中的用途。

本发明的另一个目的是提供一种抗原，为所述脱二氧喹烯酮半抗原或由所述方法直接得到的脱二氧喹烯酮半抗原与牛血清白蛋白的偶联物。

本发明的还一个目的是提供一种多克隆抗体，所述多克隆抗体是将所述脱二氧喹烯酮半抗原或由所述方法直接得到的脱二氧喹烯酮半抗原与牛血清蛋白的偶联物作为抗原免疫动物后获得的。

本发明的再一个目的是提供一种特异性检测脱二氧喹烯酮的试剂盒，所述试剂盒包括下述1）-9）：

1）碳酸盐缓冲液：

Na₂CO₃        1.59g/L

NaHCO₃        2.93g/L

溶剂为蒸馏水；