[发明专利]一种苦木中苦木碱含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学领域，尤其涉及一种苦木中苦木碱含量的检测方法。

背景技术

苦木为苦木科植物苦木（Picrasma quassioides(D.Don)Benn.）的干燥枝及叶。收载于《中华人民共和国药典》2010年版一部。性寒，味苦。具有清热，祛湿，解毒之功效；用于治疗风热感冒，咽喉肿痛，腹泻下痢，湿疖，毒蛇咬伤等症，是消炎利胆片等中成药的主要药材原料。苦木主要含生物碱、苦味素、苦木内酯等。生物碱主要为苦木碱，其中，苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁的含量对苦木药材的质量有着重要的影响。苦木碱乙（1-甲氧甲酰-β-咔巴啉）的结构如式I所示，苦木碱己（4-甲氧基-5-羟基-铁屎米酮）的结构如式II所示，苦木碱丁（4,5-二甲氧基-铁屎米酮）的结构如式III所示。

式I       式II

式III

《中华人民共和国药典》2010年版一部中苦木药材质量标准只有“性状”和“鉴别”项，尚无定量测定项，无法全面深入的控制药材质量。为了有效控制苦木药材质量，比较不同药用部位的差别，对苦木药材中苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁的含量进行定量分析十分重要。而苦木药材质量标准尚无定量测定项，标准亟待提高，目前对苦木中苦木碱的定量分析方法无法对苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁同时进行定量。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种苦木中苦木碱含量的检测方法，该方法可以同时对苦木中苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁同时进行定量分析。

本发明提供了一种苦木中苦木碱含量的检测方法，包括以下步骤：

步骤1：取苦木碱乙标准品、苦木碱己标准品、苦木碱丁标准品，以醇类为溶剂，配制含有苦木碱乙标准品、苦木碱己标准品和苦木碱丁标准品的标准品溶液；取苦木干燥粉碎后与醇类水溶液混合，经回流提取、冷却定容、过滤，获得待检溶液；

步骤2：取标准品溶液经HPLC检测；

以苦木碱乙标准品的峰面积为第一纵坐标，苦木碱乙标准品的进样量为第一横坐标，绘制苦木碱乙标准品的标准曲线；

以苦木碱己标准品的峰面积为第二纵坐标，苦木碱己标准品的进样量为第二横坐标，绘制苦木碱己标准品的标准曲线；

以苦木碱丁标准品的峰面积为第三纵坐标，苦木碱丁标准品的进样量为第三横坐标，绘制苦木碱丁标准品的标准曲线；

步骤3：取待检溶液经HPLC检测，获得待检溶液的峰面积，与苦木碱乙标准品的标准曲线、苦木碱己标准品的标准曲线、苦木碱丁标准品的标准曲线比较，根据标准曲线法获得待检溶液中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的含量；

步骤2或步骤3中HPLC检测的色谱条件为：采用C18色谱柱，柱温20℃～40℃，检测波长为205nm～280nm，以乙腈为流动相A相、酸水为流动相B相，流动相流速为1mL/min；梯度洗脱程序为：0～35min，乙腈体积百分数由5%至45%；35min～40min，乙腈体积百分数由45%至80%；40min～50min，乙腈体积百分数由80%至90%；50min～60min，乙腈体积百分数由90%至95%；

其中，醇类为甲醇或乙醇，酸水中酸的体积分数为0.1%～1%，酸的种类为磷酸、甲酸或醋酸。

本发明提供的方法采用高效液相色谱法（HPLC），通过调整色谱条件，将苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁逐一分离，从而对苦木中苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁同时进行定量分析。

目前常采用的C18色谱柱可接受的pH值为2～8，流动相的pH值小于2时，会导致键合相的水解；当流动相pH值大于7时硅胶易溶解。液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相对样品具有一定的溶解能力且与样品不产生化学反应，其黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；且流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用紫外检测器，则应使用对紫外吸收较低的溶剂配制。其沸点不可以太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。因此，本发明提供的检测方法中，采用乙腈和酸水作为流动相，其中乙腈作为流动相的A相，酸水为流动相的B相。

作为优选，流动相B相采用的酸水中酸为磷酸。

作为优选，流动相B相采用的酸水中酸的体积百分数为0.2%。

优选的，流动相B相采用体积百分数为0.2%的磷酸水溶液。

作为优选，检测采用紫外检测器。

作为优选，醇类为甲醇。