[发明专利]从伏贴石杉中提取石杉碱甲的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物碱的提取方法，具体涉及从伏贴石杉中提取石杉碱甲的方法。

背景技术

石杉碱甲，又称福定碱，是从石杉科植物中分离得到的一种天然生物碱，它能渗透大脑内记忆组织，迅速提高脑内乙酰胆碱的含量，从而直接激活脑神经传导功能，提高信息传递速度，增强大脑记忆能力，全面改善脑功能。迄今为止，石杉碱甲是世界上唯一一种纯天然植物中提取的用于预防和治疗各类大脑记忆功能障碍的药物。作为一种可逆性乙酰胆碱酯酶（AChE）抑制剂，石杉碱甲对重症肌肉无力、记忆力减退和老年性痴呆具有较好的治疗效果，且药效持续时间较长，无严重不良反应，是目前上述病症的最有效的药物。据知，市场上石杉碱甲的价格昂贵，纯度1%石杉碱甲售价为6250元/kg，纯度5%石杉碱甲售价为25万元/kg，而纯度99%石杉碱甲的售价为350万元/kg，生产高纯度的石杉碱甲极具经济效益。

到目前为止，已在多种石杉科植物中提取得到了石杉碱甲，如石杉科的蛇足石杉、皱边石杉、四川石杉等。目前石杉碱甲的主要来源为蛇足石杉（千层塔），但石杉碱甲在千层塔中的含量很低，仅为0.118‰。如公开号为CN1448390A的发明专利公开了一种从中草药千层塔中提取石杉碱甲的方法，它依次包括以下步骤：原料粉碎、浸渍、萃取（反复）、柱层析、结晶、高效液相色谱选段、浓缩干燥、得到成品。成品纯度高达98%，但收率较低，仅为十万分之七到九。该工艺采用的设备昂贵，对技术操作人员熟知要求较高，且仅局限于实验室应用，不适合大规模工业化生产。该工艺大量使用氯仿作为萃取溶剂，而氯仿是一种价格较高的有机溶剂，容易挥发且有一定的毒性，使用时容易污染环境，而且成品中容易有氯仿残留，不利于人体健康。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从伏贴石杉中提取石杉碱甲的方法，该方法简单环保、成本低廉，以该方法提取的石杉碱甲收率高，纯度大。

本发明提供的技术方案是一种从伏贴石杉中提取石杉碱甲的方法，包括以下步骤：

1）将伏贴石杉粉碎至10～20目，用70v%乙醇回流提取2～3次，每次1～2h，合并提取液，过滤，将滤液浓缩至伏贴石杉重量的4～6倍；

2）将浓缩液上HPD-826大孔树脂柱层析，先水洗柱至流出液澄清，再分别用15v%、50～60v%乙醇洗柱，收集50～60v%乙醇洗脱液；

3）往上述洗脱液中加入1～1.5‰的活性炭，加热回流脱色20～30min，滤去杂质，得到澄清液；

4）将上述澄清液加水沉淀2～3次，过滤，合并滤渣，往滤渣中加入95v%乙醇，搅拌溶解，将混合溶液浓缩至原体积的一半，趁热加入有机溶剂调节极性至5.8～6.0，静置冷却，析出晶体；

5）将晶体溶于95v%乙醇中，制成饱和溶液，加入有机溶剂调极性至5.8～6.0，静置，析出晶体，干燥，即为高纯度的石杉碱甲。

上述方法:

步骤1）中，70v%乙醇的用量为伏贴石杉重量的8～10倍。

步骤2）中，申请人经多次对比试验，挑选HPD-826型大孔树脂柱，该树脂对石杉碱甲的吸附和解吸附效果最好，针对性最强。

上柱时，浓缩液的流速为0.5BV/h；洗脱时，水的流速为1BV/h；15v%乙醇的流速为0.5～1BV/h，用量为1～2BV；50～60v%乙醇的流度为0.7～1BV/h，用量为2～2.5BV时。

步骤4）中，利用石杉碱甲不溶于水的特性，本发明采用加水沉淀法来分离纯化石杉碱甲，往澄清液中加入其重量4～5倍的水，静置0.5～1h，待石杉碱甲沉淀下来后过滤，留滤渣备用；再将滤液继续加水沉淀，如此重复2～3次，石杉碱甲基本沉淀完全。合并以上滤渣，将滤渣溶解于95v%乙醇中，95v%乙醇的用量为滤渣重量的3～4倍。

采用极性较大的有机溶剂来提高浓缩液的极性至5.8～6.0，此时浓缩液中的石杉碱甲因溶解度降低而析出，所述有机溶剂为乙二醇或二甲基甲酰胺，乙二醇的极性值为6.9，二甲基甲酰胺的极性为6.4。

步骤5）中，为进一步纯化石杉碱甲，将步骤4）制得的晶体再次溶于95v%乙醇中，配成饱和溶液，并调节饱和溶液的极性至5.8～6.0，石杉碱甲因溶解度降低并析出，采用的有机溶剂为乙二醇或二甲基甲酰胺。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、本发明采用的原料伏贴石杉（Huperzia appressa）为石杉科石杉属小衫兰组伏贴石杉的全草，石杉碱甲在伏贴石杉中的含量为蛇足石杉的十倍，约为0.2004%，这势必将提高了成品的收率，从而提高生产收益。