[发明专利]一种从食醋发酵过程中提取微生物总基因组的方法

权利要求书

1.一种从食醋发酵过程中提取微生物总基因组的方法，其特征在于，包括如下步骤：

①食醋发酵样品预处理：取液态或半固态样品0.2-5g在4℃6000-8000×g离心10-30min，弃上清，于-80℃预冻后真空冷冻干燥，研磨样品至粉末状，待用；固态样品置于-20℃预冷的无菌研钵中，倾入液氮，研磨样品至粉末状，待用。

②微生物基因组DNA的抽提：向预处理后的样品中加入1.0mL-2.0mL DNA提取液，置于37℃的恒温振荡摇床在200-400rpm振摇15-30min后，加入质量比1%-5%的SDS，充分混匀后置于65℃水浴锅中孵育1-3h，每15min-20min颠倒几下，向抽提液中加入1-2倍体积的PEG8000，室温放置1-2h，10000-12000×g离心10-30min，弃上清，将沉淀溶于1-2mL TE缓冲液,加入3-5mol/L乙酸钾溶液,4℃放置15-60min，12000-15000×g离心10-20min，取上清，加入等体积的酚-氯仿-异戊醇混合液，酚∶氯仿∶异戊醇体积比为25∶24∶1，12000-15000×g离心10-30min。

③除杂及漂洗浓缩：吸取步骤②DNA抽提后的上清水相，加入等体积的氯仿-异戊醇混合液，氯仿∶异戊醇体积比为24∶1，12000-15000×g离心5-10min，吸取上清，加醋酸铵-异丙醇混合液，-20～-80℃放置1-3h沉淀DNA，12000-15000×g离心10-20min，弃上清，取沉淀；用预冷的70%乙醇漂洗沉淀，12000-15000×g离心5-10min，弃上清，室温放置，直至乙醇挥发完全，加入50-100μL双蒸水溶解沉淀，得到微生物基因组总DNA。

2.如权利要求1所述的一种从食醋发酵过程中提取微生物总基因组的方法，其特征在于，步骤①中所述-80℃预冻时间为30-60min，真空冷冻干燥时间为2-5h。

3.如权利要求1所述的一种从食醋发酵过程中提取微生物总基因组的方法，其特征在于，步骤②所述DNA提取液组成包括：50-100mmol/L Tris-HCl，1-1.5mol/L NaCl，50-100mmol/LEDTA，50-100mmol/L磷酸钠缓冲液，0.5%-2%w/v CTAB，1%-3%w/v PVPP，pH8.0，溶剂为水。

4.如权利要求1所述的一种从食醋发酵过程中提取微生物总基因组的方法，其特征在于，步骤②所述乙酸钾溶液的添加量为10%-20%v/v。

5.如权利要求1所述的一种从食醋发酵过程中提取微生物总基因组的方法，其特征在于，步骤③所述醋酸铵-异丙醇混合液与上清液体积比为1∶1-2，醋酸铵溶液:异丙醇体积比为1∶1-5。

6.如权利要求1所述的一种从食醋发酵过程中提取微生物总基因组的方法，其特征在于，步骤③所述醋酸铵溶液的浓度为6-8mol/L，pH为7-7.5。

7.如权利要求5所述的一种从食醋发酵过程中提取微生物总基因组的方法，其特征在于，所述醋酸铵-异丙醇混合液中醋酸铵溶液∶异丙醇体积比为1∶3。

8.权利要求1-7任一所述的提取微生物总基因组的方法用于食醋发酵过程中混合微生物的宏基因组测序的用途。