[发明专利]除去抗A、抗B抗体以及多反应性免疫球蛋白IgG的免疫球蛋白G(IgG)浓缩物

说明书

技术领域

本发明涉及除去抗A(AcaA)和抗B(AcaB)抗体的免疫球蛋白G(IgG)浓缩物，其具有明显降低的多反应性，以及涉及获得上述浓缩物的方法。 

背景技术

自从Cohn研制出乙醇沉淀法，富集免疫球蛋白(Ig)成分的人血浆用于各种感染或者先天性缺陷疾病的治疗(Cohn等,1946,J.Am.Chem.Soc.68,459;Oncley等,1949,J.Am Chem.Soc.71,541). 

对用于静脉注射(IgIV)的高纯化Ig复合结构的需求越来越多，例如从人血浆中获得。免疫球蛋白的络合物结构(由二硫键连接的四肽链)，以及来自于数千供血者的血浆混合物中存在着的各种抗体，成为目前不能够促进免疫球蛋白生物技术发展的因素。虽然通过基因工程生产单克隆抗体，它们的极端特异性对治疗应用相当于一个缺点，在治疗应用中多种特异性显得是必需的。 

另一方面，例如，在近些年来的欧洲和美国，例如源自身免疫的许多病理，目前用IgG浓缩物治疗会导致它的一个缺陷。 

获得免疫球蛋白尤其是IgG浓缩物的方法，除了用乙醇使蛋白选择性沉淀，也可以包含其它各种方法，例如聚乙二醇沉淀法，受控蛋白水解酶法处理……用于除去免疫球蛋白聚合物中的聚集体，这些局集体可以激活与过敏反应危险相关的补充系统。同时，在体内存在于IgGIV中的二聚体和动脉压下降相关(Bleeker W.K.等,Blood,95,2000,p.1856-1861). 

Steinbuch等已描述了一种可选择的方法是乙醇沉淀法(Rev.Et. Clin.et Biol.1969,XIV,1054)，其依赖于辛酸沉淀。这种酸沉淀了绝大多数的血浆蛋白，并把免疫球蛋白留在上层清液中。通过阴离子交换剂DEAE纤维素来提纯这些免疫球蛋白，提纯的条件是该阴离子交换剂不保留IgG。接着对非保留IgG的成分进行浓缩。 

同时使用色谱技术已经研发了各种方法增加产品的纯度。特别提及是的专利申请EP0703922和WO99/64462，其为至少两个相关联的连续色谱分析步骤，一个使用阴离子交换，另一个使用阳离子交换。这些方法的特异性在于该阴离子交换剂的性能，在传统的色谱分析条件下不会阻留免疫球蛋白G，但是它们反而在预提纯步骤中固定共纯化大多数其它蛋白。也可以引用由申请人提交的类似专利申请WO02/092632，其公开了在阴离子交换剂上，在碱性pH下使用单个色谱分析步骤制备Ig浓缩物，在色谱分离介质上将它们固定。 

然而，许多科学刊物指出通过上述分馏技术获得的IgG的注射会导致接受治疗的患者偶尔会出现溶血现象，有时还很严重。例如，可以引用以下文献：Buchta C等,Biologicals,33,2005,41-48,Wilson J.R.等,Muscle &Nerve,29(9),1997,1142-1145,Copelan E.A.等,Transfusion,26,1986,410-412and Misbah S.A.等,Drug Safety,9,1993,254-262.对患有溶血的病人血液影响的研究，尤其是使用直接抗人球蛋白试验(直接抗人球蛋白试验-DCT)进行的研究，显示红细胞表面被直接抑制抗原A、B或者D的免疫球蛋白覆盖，因此导致溶血。这就是为什么在市场上可得到的IgG是通过选择性血浆获得的，以避免存在抗-D免疫球蛋白，或在抗体-A或抗体-B中滴定度高的其他抗体。 

Buchta等引用上述文献，考虑通过不同途径使源于O和B血型供体的抗A抗体、源于O和A血型供体的抗B抗体和血浆衍生物例如IgG显著减少，这是为了使溶血的风险降到最低，当使用这些血浆衍生物治疗患者的时候，该溶血风险与这些抗体的水平直接相关。特别要正视选择供体，去除抗A和抗B抗体，生产源于特定血型(A和/或B血型)血浆的衍生物，以及排除那 些具有高滴定度抗A和抗B抗体的血浆的批次。考虑到成本或提取步骤的复杂性，一些方法被认为是不现实的。应当注意在上述乙醇分馏期间，部分除去了抗A和抗B抗体。 

由于对IgG的需求不断地增加，也就需要逐渐增大的供者库，统计学上将包括更多的O型血的供者。因此，血浆衍生物如IgG将包含大量抗A和抗B抗体，由于这些抗体的浓度太高，通过传统分馏很难去除。 

这些增加的需求使得只从AB血型中选择以确保低含量的抗A和抗B抗体成为不可能。