[发明专利]一种双片苣苔组织培养及快速繁殖的方法

权利要求书

1.一种双片苣苔组织培养及快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、外植体消毒处理：以双片苣苔（Didymostigma obtusum（Clarke）W.T.Wang）植株叶片为外植体，先用清水将外植体冲洗干净，消毒后再无菌水冲洗干净，得到消毒后的外植体；

b、不定芽的初代诱导：将消毒后的外植体接种到诱导培养基上，在温度25±1℃、光照强度50μmol·m^-2·s^-1、光照时间12h·d^-1的条件下，叶片外植体诱导形成不定芽，所用的诱导培养基为：每升含有N-苯基-N′-1，2，3-噻二唑-5-脲2.0～3.0μmol、萘乙酸0.2μmol、蔗糖30g、琼脂5.5g，其余为MS培养基，pH为5.6；

c、芽的继代增殖：将不定芽丛切成块，转入继代的培养基上，在温度25±1℃、光照强度50μmol·m^-2·s^-1、光照时间12h·d^-1的条件下，从生芽生长健壮成芽苗，所用的继代的培养基为：每升含有苄氨基嘌呤0.5μmol、蔗糖30g、琼脂5.5g、其余为MS培养基，pH为5.6；

d、生根培养：将高3cm的芽苗分切转入生根培养基上，在温度25±1℃、光照强度50μmol·m^-2·s^-1、光照时间12h·d^-1的条件下，生根的试管苗形成，所述的生根培养基为：每升含有3-吲哚丁酸2.0～4.0μmol、萘乙酸2.0μmol、蔗糖30g、琼脂5.5g、其余为1/2MS培养基，pH为5.8；

e、试管苗移栽：将长好根的试管苗移栽到移栽基质中，放置于遮荫温室中培养，浇水保湿，其他按常规条件进行培养，由此得到双片苣苔幼苗，所用的移栽基质为：腐质土和黄泥土按质量比1∶1混合均匀。

2.根据权利要求1所述的双片苣苔组织培养及快速繁殖的方法，其特征在于，所述的双片苣苔为野生的双片苣苔。

3.根据权利要求1所述的双片苣苔组织培养及快速繁殖的方法，其特征在于，所述的消毒为使用质量分数1%NaClO溶液消毒10～11分钟。