[发明专利]小鼠肝脏原代细胞分离方法

说明书

技术领域

本发明属于细胞技术领域，特别涉及一种小鼠肝脏原代细胞分离方法。

背景技术

非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)，是一种以肝细胞内甘油三酯(Triglyceride,TG)过度沉积为特征的疾病，该疾病现已在全球迅速蔓延并在人群中高度流行。

当肝脏甘油三酯的重量超过肝脏重量的5％，光镜下每单位面积大于30%的肝实质细胞出现脂变时，便认为非酒精性脂肪肝形成。NAFLD是欧美等西方发达国家肝功能酶学异常和慢性肝病最常见的原因，普通成人NAFLD患病率为15%-40%，肥胖症患者NAFLD患病率为60%-95%，2型糖尿病和高脂血症患者NAFLD患病率分别为28%-55%和27%-92%。随着肥胖症和代谢综合征在全球的流行，近20年亚洲国家NAFLD增长迅速且呈低龄化发病趋势。同时，引人注意的是，尽管亚洲人群的肥胖发病率依然低于西方国家，但是NAFLD和代谢疾病的发病率并不低。两组在亚洲分别独立进行的流行病学调查显示：非肥胖人群的NAFLD发病率分别高达16.1%和12.6%。然而目前，除了改变生活方式之外，依然没有治疗NAFLD的公认方法，所以，亟待开发一种兼顾治疗肥胖与非肥胖人群NAFLD的药物。

小檗碱(Berberine,BBR)是从中国传统中药黄连中提取的季胺类生物碱，BBR呈强烈的黄色，所以在古代，小檗属物种被用来染羊毛，皮革和木材，如今，印度北部仍在使用在使用小檗属物种给羊毛染色。

作为一种传统的药物，BBR具有一定的抗感染作用，如真菌白色念珠菌，酵母菌，寄生虫，细菌或病毒，BBR与在抗耐药白念珠菌感染中，与氟康唑发挥协同效应，并可能有抗MRSA感染作用{2000#171;Xu,2009#172;Yu,2005#173}。当与甲氧基大风子品(methoxyhydnocarpin,MHC)，一种多药耐药泵抑制剂联用时，BBR能抑制金黄色葡萄球菌和铜绿微囊藻的生长。BBR是滴眼制剂的有效成分，有证据表明它能治疗沙眼。BBR在印度被用于利什曼病的标准治疗。BBR能预防和抑制促炎细胞因子，E-选择素，并增加脂联素的表达。

BBR是中国传统医学的瑰宝，古时便常用于治疗腹泻、糖尿病。近年来，随着中西医结合与基础研究的发展，国内外研究中对BBR的功效研究更是拓展到了代谢相关疾病的诸多方面：(1)调节血脂：BBR在基因转录后水平上，通过作用于3'UTR区域稳定低密度脂蛋白受体（LDLR）来降低血脂的，与目前使用的他汀类降血脂药物的作用机理完全不同；Kim等发现BBR通过调节中枢和外周的AMPK表达，发挥减肥和降低血脂的作用。Wang等发现BBR与植物固醇可发挥协同作用，在高脂高糖喂养的仓鼠中降低胆固醇的吸收。(2)治疗糖尿病：Lee等发现，BBR能改善啮齿类动物的糖尿病和胰岛素抵抗，其机制可能是激活AMPK的表达；Turner等发现BBR及其衍生物通过激活AMPK改善胰岛素抵抗。随后的一些BBR改善啮齿类动物糖尿病和胰岛素抵抗的报道了类似的结果。同时，相关的临床试验结果也显示了BBR治疗糖尿病的效果。(3)调节内皮细胞功能：有报道显示BBR能改善血管内皮细胞功能，其功能在临床试验中也得到了验证。(4)治疗脂肪肝：BBR在肥胖小鼠和高脂喂养大鼠中显示出其治疗脂肪肝的显著功效，但是，它是否具有治疗非肥胖NAFLD的作用依然未知。