[发明专利]一种纯化FITC标记的虾白斑综合症病毒（WSSV）的方法

说明书

技术领域

本发明涉及病毒学与免疫学技术领域，特别是涉及一种纯化FITC标记的对虾白斑综合症病毒（WSSV）的方法。

背景技术

对虾白斑综合症病毒（White Spot Syndrome Virus，又称WSSV）是当前中国对虾养殖业危害最重的病害，其侵染宿主的过程和机理一直是研究热点。目前对于WSSV侵染过程的研究多局限于个体水平，在细胞层面上的研究甚为缺乏，急需有可视化的WSSV作为实验工具来促进研究。

使用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记病毒并运用于研究已经在其他病毒中实现。Benne,CA等人利用FITC标记的流感病毒(H3N2)证明了其表面活性蛋白A而非表面活性蛋白D是大鼠巨噬细胞吞噬H3N2的调理素（Cornelis A.Benne,Barry Benaissa-Trouw,Jos A.G.Van Strijp,Cornelis A.Kraaijeveld,J.Freek F.Van Iwaarden.Surfactant protein A,but not surfactant protein D,is an opsonin for influenza A virus phagocytosis by rat alveolar macrophages.European Journal of Immunology,27(1997),886-890）。Joan E.Nichols等人还利用FITC标记的流感病毒作为表征，对单核巨噬细胞和淋巴细胞在流式细胞仪上进行分离（Joan E.Nichols,D.J.Mock,N.J.Roberts.Use of FITC-labeled influenza virus and flow cytometry to assess binding and internalization of virus by monocytes-macrophages and lymphocytes.Archives of Virology,130（1992），441-455.）。

目前已有文献报道，通过FITC标记的WSSV开展个例研究。Li等首先报道了使用FITC标记研究β-integrin在WSSV侵染斑节对虾血细胞中发挥的作用（Deng-Feng Li,Ming-Chang Zhang,Hai-Jie Yang,Yan-Bing Zhu,Xun Xu.2007.β-integrin mediates WSSV infection.Virology,368(2007),122-132.）。Wu等在研究沉默Rab GTPases后对于斑节对虾血细胞吞噬能力的影响中也使用了FITC标记的WSSV。以上2篇文献中使用的FITC标记法都是先将WSSV与FITC混合孵育，然后通过三次高速离心（10,000×g，10min）去除上清，再加入TM buffer重悬（50mM/L Tris–HCl,10mM/L MgCl2,pH7.6）分离带有标记的WSSV与游离的FITC，纯化过程繁琐、耗时长，并且需要使用高速离心机。

分子筛是一种具网状结构的天然或人工合成的化学物质。如交联葡聚糖、沸石等，当作为层析介质时，可按分子大小对混合物进行分级分离。通过本发明，可以更为简便地纯化FITC标记的WSSV，为研究WSSV在细胞水平上的侵染过程提供帮助。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种纯化FITC标记的对虾白斑综合症病毒（WSSV）的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种纯化FITC标记的虾白斑综合症病毒（WSSV）的方法，将经FITC标记的虾白斑综合症病毒混合液利用分子筛柱进行纯化；收集含有FITC标记的WSSV的洗脱液，即得到纯化的可视化WSSV；其中，分子筛柱填料为G-25M，洗脱液为PBS缓冲液。

进一步地说，将经FITC标记的虾白斑综合症病毒混合液转移至装填有G-25M分子筛填料的分子筛柱，整个过程用PBS作为洗脱液，并依靠重力进行洗脱；收集含有FITC标记的WSSV的洗脱液，即得到纯化的可视化WSSV；其中，装填有G-25M分子筛填料的分子筛柱先经2倍柱体积的PBS清洗。

所述FITC标记的WSSV混合液为将保存于PBS溶液中浓度为3.0×10⁶Copy/μl的虾白斑综合症病毒与FITC溶液按照体积比5-10:1混合，室温下孵育0.5-2h。

所述FITC溶液浓度为1μg/μl。