[发明专利]一种蜡状芽孢杆菌及其益生菌粉及该菌粉的制备和用途

权利要求书

1.一种蜡状芽孢杆菌，其特征在于：分类命名为蜡状芽孢杆菌(Bacillus.cereus) BC158，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 7433。

2.利用权利要求1所述的蜡状芽孢杆菌BC158生产蜡状芽孢杆菌益生菌粉的方法，其特征在于：其具体制备步骤为：

步骤一、斜面固体培养：将所述的蜡状芽孢杆菌BC158接种在固体斜面培养基上，37℃培养24h，得到斜面固体培养的菌种，备用；

所述的固体斜面培养基的组成成分为：按质量百分比，固体斜面培养基中含有牛肉膏0.3%-0.4%，蛋白胨1%-1.2%，氯化钠0.5%，琼脂粉1.5%-2%，余量为水；

步骤二、一级种子培养：取步骤一所制备的斜面固体培养的菌种1-3接种环接种于装有80-120mL 一级种子培养基的500mL 三角瓶中，然后34-37℃，220-250rpm 摇床培养10-16h，得到一级种子液，备用；

所述的一级种子培养基的组成成分为：按质量百分比，一级种子培养基中含有酵母膏0.3-0.5％，蛋白胨0.5-0.7％，蔗糖0.5-1.0％，磷酸氢二钠0.3-0.6％，硫酸镁0.01-0.04％，硫酸锰0.06-0.09％，余量为水；

步骤三、二级种子培养：将上述步骤二培养好的一级种子液接种于装有1.5L二级种子培养基的5L 三角瓶中，接种量为二级种子培养基体积的4-7％，然后34-37℃，220-250rpm摇床培养12-18h，得到二级种子液，备用；

所述的二级种子培养基的组成成分为：按质量百分比，二级种子培养基中含有蔗糖2.0-2.5％，玉米浆1.5-2.0％，硫酸镁0.01-0.03％，磷酸氢二钾0.5-1.2％，磷酸二氢钾0.075-0.100％，余量为水；

步骤四、三级种子培养：将上述步骤三培养好的二级种子液接种于装有60L三级种子培养基的100L 发酵罐中，接种量为三级种子培养基体积的3-5％；然后34-37℃，150-200rpm通风搅拌培养24-32h，得到三级种子培养液，备用；

所述的三级种子培养基的组成成分为：按质量百分比，三级种子培养基中含有玉米粉2.5-3.5％，豆饼粉2.5-3.0％，玉米浆2.0-2.5％，余量为水；

步骤五、发酵罐培养：将上述步骤四所制备的三级种子培养液接种于发酵培养基中，接种量为发酵培养基体积的2-4％，然后于34-37℃，150-200rpm的通风搅拌培养24-32h，镜检芽孢率在95％以上，停止培养，放罐，得到发酵液；

所述的发酵培养基的组成成分为：按质量百分比，发酵培养基中含有玉米粉3.0-4.0％，豆饼粉2.5-3.0％，玉米浆2.0-2.5％，氯化钠0.5-1.0％，余量为水；

步骤六、将上述步骤四所得发酵液中添加玉米淀粉，添加量为发酵液质量的8-15％，搅拌均匀后将所得混合物进行喷雾干燥，即得到蜡状芽孢杆菌益生菌粉。

3.如权利要求2所述的生产蜡状芽孢杆菌益生菌粉的方法，其特征在于：步骤六将所得混合物浓缩后进行喷雾干燥，浓缩的具体操作方法为，采用三效降膜式蒸发器将所得混合物进行蒸发浓缩，一效蒸发器的蒸发温度为85℃，二效蒸发器的蒸发温度为75℃，三效蒸发器的蒸发温度为65℃，当料液浓缩比达到1:3时停止浓缩。

4.如权利要求2所述的生产蜡状芽孢杆菌益生菌粉的方法制成的蜡状芽孢杆菌益生菌粉，其特征在于：蜡状芽孢杆菌益生菌粉的组成成分包括玉米淀粉和蜡状芽孢杆菌。

5.如权利要求4所述的蜡状芽孢杆菌益生菌粉，其特征在于：蜡状芽孢杆菌的活菌含量为3×10⁹-5×10¹⁰CFU/g，水分的质量百分比为5%，菌粉颗粒直径为0.06mm。

6.如权利要求2所述的生产蜡状芽孢杆菌益生菌粉的方法制成的蜡状芽孢杆菌益生菌粉在动物养殖的饲料添加剂中的应用。