[发明专利]用于鉴定金花茶的SNP分子标记及其应用

权利要求书

1.用于鉴定金花茶的SNP分子标记，其特征在于，其位于如SEQ ID NO.1所示的金花茶GBSSI基因的第141位碱基，此处碱基为T，则鉴定为金花茶物种。

2.权利要求1所述SNP分子标记在金花茶分子标记辅助育种中的应用。

3.用于PCR检测金花茶的特异性引物对，其特征在于，包括上游引物F5’-CTGTGGACGCAAACATCCACTTGAT-3’和下游引物R5’-CCATGTATTTCTTGCCAGTGCCCT-3’。

4.一种鉴定金花茶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取待测植物的基因组DNA；

2）以待测植物的基因组DNA为模板，利用权利要求3所述的特异性引物对PCR扩增金花茶GBSSI基因；

3）检测PCR扩增产物；

其中，金花茶GBSSI基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤3）中采用酶切法检测PCR扩增产物，酶切产物的琼脂糖凝胶电泳结果呈现2条带，则待测植物为金花茶物种；

其中，酶切使用的限制性内切酶为BstXI。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2）中25μL PCR反应体系中包括：添加Mg²⁺的10×EX Taq缓冲液2.5μL，2.5mM dNTPs2μL，10μM上、下游引物各1μL，5U/μL EX Taq DNA聚合酶0.2μL，50μg/μL基因组DNA1μL，余量为ddH₂O。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2）中PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸50s，35个循环；72℃延伸10min，4℃保存。

8.含有权利要求3所述引物对的用于检测金花茶的试剂盒。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液、标准阳性模板中的一种或多种。

10.权利要求3所述引物对或权利要求8或9所述试剂盒在检测金花茶中的应用。