[发明专利]一种人甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，涉及检测血清中人甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）含量的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其测试方法。 

背景技术

甲状腺过氧化物酶（thyroid peroxidase，TPO）是催化甲状腺激素的重要酶，可以催化碘离子与甲状腺球蛋白酪氨酸残基的加成反应，以此合成甲状腺素（T₄）或三碘甲腺原氨酸（T₃）等甲状腺激素。TPO由甲状腺滤泡细胞合成，它由933个氨基酸残基组成，分子量为103kD，在滤泡腔面的微绒毛处分布最为丰富。 

TPOAb作为自身免疫性甲状腺疾病的一种重要自身抗体，在自身免疫性甲状腺疾病（如有桥本甲状腺炎、Graves病）的鉴别和诊断中具有重要的临床意义。对原发性甲减患者，结合hTSH升高，可以发现早期甲减病人。TPOAb的测定还可作为Graves病、桥本甲亢等诊断和鉴别诊断的首选指标。 

化学发光免疫检测技术于上个世纪80年代，继酶联免疫技术和放免技术之后发展起来的新兴技术，相对于后两者化学发光免疫技术具有高灵敏度、高特异性，操作简便、快速，标记结合物稳定，同时无放射性同位素损伤和污染等特点，因此近年来在临床检测分析中被广泛推广使用。 

发明内容

本发明需要解决的技术问题在于提供一种人甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）定量测定试剂盒及其检测方法，采用该试剂盒进行TPOAb检测具有较高的灵敏度和特异性，操作更简便，检测时间更短。 

本发明提供了检测TPOAb化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：磁微粒试剂；TPOAb校准品；TPOAb质控品；TPOAb抗试剂A；TPOAb抗试剂B；清洗浓缩液；发光底物溶液；样本稀释液。 

所述的磁微粒试剂为连接羊抗FITC抗体的磁微粒溶液； 

所述的校准品及质控品为含有一定量TPOAb的BSA缓冲液； 

所述的试剂A为含有一定量异硫氰酸荧光素（FITC）标记的TPO抗原溶液； 

所述的试剂B即二抗酶标试剂，是碱性磷酸酶（AP）标记的人IgG抗体的混合物； 

所述的清洗浓缩液是含有Tris、NaCl和表面活性剂等的缓冲液； 

所述的发光底物溶液是含LumigenAPS-5发光液的缓冲液； 

所述的样本稀释液是含有BSA的溶液。 

本发明所提供的检测TPOAb的样品前处理方法，包括以下步骤： 

1、样品前处理 

对临床血清，3000rpm离心5分钟，取上层液即可进行分析测定。待测样品2-8℃存放不得超过48小时，若48小时未检测，应于-20℃以下保存，但不应超过30天。 

2、实验前准备 

实验前需将所有试剂放置至室温；准备好一次性平底试管和磁分离器及温育时用于覆盖磁分离器的塑料膜；调节水浴箱温度为37℃；准备化学发光测定仪，并仔细阅读仪器使用说明书。 

3、试剂准备 

实验前将试剂盒中各试剂在置混匀仪上充分混匀；磁微粒试剂混匀后应为均匀悬浊液，无明显凝集。 

4、利用上述检测TPOAb的化学发光免疫分析试剂盒检测样品。 

本发明的检测方法如下： 

（1）加样与免疫反应：在每一平底试管中加入15μl TPOAb校准品、质控品或待测样本（预先用样本稀释液进行1:20-100稀释）；30μl试剂A，混匀后，37℃温育30分钟；加入30μl磁微粒试剂，混匀后，37℃温育15分钟。 

（2）洗涤：将平底试管在磁分离器上静置2分钟，然后弧线倾倒上清液，将试管及磁分离器一同倒置在吸水纸上拍干；每管中加入300μl清洗液，混匀后，将平底试管在磁分离器上静置2分钟，然后弧线倾倒上清液，将试管及磁分离器一同倒置在吸水纸上拍干；重复两次。 

（3）加入二抗酶标试剂：在每一平底试管中加入60μl试剂B，混匀后，37℃温育30分钟。 

（4）洗涤：同（2）步骤。 

（5）加入发光底物溶液：每个试管加入200μl发光底物。 

（6）读取发光值：用化学发光仪测定每管的发光值。 

本发明具有以下优点： 

1、使用磁珠为固相，使免疫反应更接近液相，反应更充分和迅速，而且使结合的免疫复合物更加容易分离，降低了非特异性吸附。 

2、使用的试剂B为单克隆抗体混合物，使免疫反应的亲和力更高，而且单抗的生产批间差异相对小，更容易保证产品的批间稳定。