[发明专利]一种人甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种人甲状腺过氧化物酶抗体TPOAb的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：将羊抗FITC抗体与直径为0.1-5微米的磁微粒连接组成固相试剂，经捕捉反应体系中的FITC标记抗原、人甲状腺过氧化物酶抗体以及二抗酶标记试剂后形成固相-抗原-抗体-酶标二抗夹心复合物；所述的二抗酶标抗体中使用的酶是碱性磷酸酶AP；所述的二抗酶标试剂的偶联方法是将N-琥珀酰胺3-（2-吡啶二巯基）丙酸活化的抗体与Traunt’s试剂活化的碱性磷酸酶以1:0.5-2的比例混合，并用凝胶层析柱分离纯化；所使用的底物溶液为含Lumigen APS-5发光液的缓冲液。

2.如权利要求1所述的TPOAb磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：磁微粒试剂；TPOAb校准品；TPOAb质控品；TPOAb试剂A；TPOAb试剂B；清洗浓缩液；发光底物溶液；样本稀释液；

所述的磁微粒试剂为连接羊抗FITC抗体的磁微粒溶液；

所述的校准品及质控品为含有一定量TPOAb的BSA缓冲液；

所述的试剂A为含有一定量FITC标记的TPO抗原溶液；

所述的试剂B即二抗酶标试剂，是碱性磷酸酶AP标记的人IgG抗体的混合物；

所述的清洗浓缩液是含有Tris、NaCl和表面活性剂等的缓冲液；

所述的发光底物溶液是含Lumigen APS-5发光液的缓冲液；

所述的样本稀释液是含有BSA的溶液。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法如下：

（1）加样与免疫反应：在每一平底试管中加入15μl TPOAb校准品、质控品或待测样本，其均预先用样本稀释液进行1:20-100稀释；30μl试剂A，混匀后，37℃温育30分钟；加入30μl 磁微粒试剂，混匀后，37℃温育15分钟；

（2）洗涤：将平底试管在磁分离器上静置2分钟，然后弧线倾倒上清液，将试管及磁分离器一同倒置在吸水纸上拍干；每管中加入300μl清洗液，混匀后，将平底试管在磁分离器上静置2分钟，然后弧线倾倒上清液，将试管及磁分离器一同倒置在吸水纸上拍干；重复两次；

（3）加入二抗酶标试剂：在每一平底试管中加入60μl试剂B，混匀后，37℃温育30分钟；

（4）洗涤：同（2）步骤；

（5）加入发光底物溶液：每个试管加入200μl发光底物；

（6）读取发光值：用化学发光仪测定每管的发光值。