[发明专利]用量子点标记的免疫层析试纸条快速定量检测肿瘤标志物的方法及装置

说明书

技术领域

本发明涉及一种用量子点标记的免疫层析试纸条快速定量检测肿瘤标志物的方法及装置，属于检测技术领域。

背景技术

免疫层析法是将免疫标记技术与层析技术结合的一种新型检测技术，利用标记物的显色特性，对待测物进行定性、半定量或者定量检测。它是以微孔滤膜为固相载体，待测液为流动相，通过微孔滤膜的毛细作用和虹吸作用使待测液向前流动，同时待测液中的相关成分与固定在膜上的抗原或抗体发生特异的免疫反应，从而使免疫复合物滞留在检测带上从而得到直观的检测结果。免疫层析技术具有一系列其他检测方法所不具备的特点：操作简单快速，检测时间短，勿需对样品进行复杂的前处理，反应结果直观不需要任何后处理，操作人员不用进行专业培训，任何人都可以随时随地进行检测，免疫层析技术现已广泛应用于各个检测领域中。

现已商品化的免疫层析试纸条多用胶体金作为标记物，虽然检测结果通过肉眼可见，但是胶体金作为标记物只能进行定性检测或者半定量检测，无法完成定量检测；而某些抗原或者抗体浓度低的样本检测条带颜色太浅无法用肉眼识别。量子点（QDs）是一种半导体纳米晶，它激发光谱宽，呈连续分布，而发射光谱窄，单色性好且颜色可调，荧光强度是传统有机荧光素的20～50倍，并且具有持久的光化学稳定性，其独特的光学性质使其作为一种新型的荧光探针而得到广泛关注。用量子点取代传统的胶体金作为标记物可以弥补胶体金标记的不足。

发明内容

鉴于量子点作为新型荧光标记物在临床医学检测中的重要作用，本发明的目的在于用量子点取代胶体金作为免疫层析试纸条的标记物，提供一种量子点标记的免疫层析试纸条快速定量检测肿瘤标志物的方法。量子点做为标记物较之胶体金具有更高的灵敏度，并且能完成定性检测，半定量以及定量检测，这是胶体金免疫层析试纸条所不能及的。

一种量子点标记的免疫层析试纸条快速定量检测肿瘤标志物的方法，如图1所示，是用量子点取代胶体金颗粒作为信号标记物，与待测肿瘤标志物相应抗体偶联后喷涂或者直接涂布于结合物释放垫上，通过将样品垫、结合垫、反应膜、吸水垫按一定顺序组装制成免疫层析试纸条。进行临床检测时，在紫外灯的照射下通过观察T线和C线上是否出现荧光条带以及荧光的强弱从而判断检测结果。本发明还提供一种用于对上述试纸条进行定量检测的量子点荧光免疫检测仪器。

本发明的技术方案如下：

一种用量子点标记的免疫层析试纸条快速定量检测肿瘤标志物的方法，试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫组装而成，样品垫用于滴加样品，结合垫表面涂有量子点标记的肿瘤标志物相应抗体，硝酸纤维素膜包被有该肿瘤标志物所对应的另一位点的抗体及二抗，分别形成T线即检测线和C线即质控线，吸水垫提供待测液流动的动力。

量子点作为信号标记物将肿瘤标志物抗原和抗体的免疫反应则转化为可被识别的荧光信号，信号强弱与免疫反应的量成正比；量子点与抗体通过乙基-（3-二甲基丙基）碳化二亚胺盐酸（EDC）连接；肿瘤标志物可为AFP，CA125，CEA，hCG，NSE，PSA等任意一种。

本发明的量子点标记的免疫层析试纸条快速定量检测肿瘤标志物的检测方法，免疫层析试纸条的组装制备方法，步骤如下：

以下对本发明的技术方案做进一步说明：

1.量子点偶联肿瘤标志物相关抗体

原料质量份数比配比为：水溶性量子点：肿瘤标志物相关抗体=30～60：2～15；水溶性量子点：EDC=12～24：1～4。

(1)将水溶性量子点、肿瘤标志物相关抗体混合于磷酸缓冲液（PBS缓冲液）中，涡旋仪上低速旋转使其混匀，然后在涡旋条件下加入EDC；将上述混合溶液置于旋转混合架上，室温下反应2～3小时；

(2)反应结束后，采用离心分离进行纯化，用PBS缓冲液清洗以除去未反应的抗体和EDC，最后将产物分散在含有0.5～5%牛血清白蛋白（BSA）的PBS缓冲液中，4℃静置过夜后置于4℃保存。

2.硝酸纤维素膜的处理和蛋白的固定

(1)将同一肿瘤标志物所对应的另一位点的一抗体以及二抗（第一抗体就是能和抗原特异性结合的蛋白，也就是T线，用来检测抗原的量；二抗能和抗体结合，形成C线，主要用来说明试纸条的有效性）用PBS缓冲液稀释到0.5～3mg/mL，用点样仪喷于硝酸纤维素膜上以形成T线和C线，然后置于37℃恒温干燥箱中干燥2～4小时。