[发明专利]用量子点标记的免疫层析试纸条快速定量检测肿瘤标志物的方法及装置

权利要求书

1.一种用量子点标记的免疫层析试纸条快速定量检测肿瘤标志物的方法，其特征是：试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫组装而成，样品垫用于滴加样品，结合垫表面涂有量子点标记的肿瘤标志物相应抗体，硝酸纤维素膜包被有该肿瘤标志物所对应的另一位点的抗体及二抗，分别形成T线即检测线和C线即质控线，吸水垫提供待测液流动的动力。 

2.根据权利要求1所述检测方法，其特征是：量子点作为信号标记物将肿瘤标志物抗原和抗体的免疫反应则转化为可被识别的荧光信号，信号强弱与免疫反应的量成正比；量子点与抗体通过乙基-（3-二甲基丙基）碳化二亚胺盐酸（EDC）连接；肿瘤标志物可为AFP，CA125，CEA，hCG，NSE，PSA等任意一种。 

3.根据权利要求1所述检测方法，其特征是：定性和半定量方法如下： 

用于激发量子点的紫外灯波长范围为320nm～420nm的普通紫外灯；根据双抗夹心的原理，当待测样本中含有该肿瘤标志物的相关抗原时，复合物将同时被T线和C线捕获，紫外灯照射下出现两条荧光条带，检测结果为阳性；反之，检测样本中不含相关抗原时，则只在C线位置出现荧光条带，检测结果为阴性；如果T线和C线都不出荧光现条带则说明检测无效，条带颜色越深说明待测样本中含有的肿瘤标志物相关病原含量越高；反之，条带颜色越浅说明相关病原含量越少。 

4.根据权利要求1所述检测方法，其特征是：定量检测方法如下： 

配置一系列浓度梯度的肿瘤标志物抗原标准液，滴加到免疫层析试纸条上，5～20min后用检测仪读取T线和C线的荧光强度，分别将T/C的荧光强度及对应的抗原浓度做标准曲线，得到荧光强度与浓度对应的公式，将该公式输入到平板电脑内后，可根据待测样品对应的荧光强度得到样品中肿瘤标志物的浓度。 

5.根据权利要求1所述检测方法，其特征是所述的免疫层析试纸条的组装步骤如下： 

(1)量子点偶联肿瘤标志物相关抗体 

原料质量份数比配比为：水溶性量子点：肿瘤标志物相关抗体=30～60：2～15；水溶性量子点：EDC=12～24：1～4； 

1）将水溶性量子点、肿瘤标志物相关抗体混合于磷酸缓冲液（PBS缓冲液）中，涡旋仪上低速旋转使其混匀，然后在涡旋条件下加入EDC；将上述混合溶液置于旋转混合架上，室温下反应2～3小时； 

2）反应结束后，采用离心分离进行纯化，用PBS缓冲液清洗三次以除去未反应的抗体和EDC，最后将产物分散在含有0.5～5%BSA的PBS缓冲液中，4℃静置过夜后置于4℃保存； 

(2)硝酸纤维素膜的处理和蛋白的固定 

1)将同一肿瘤标志物所对应的另一位点的抗体以及二抗用PBS缓冲液稀释到0.5～3mg/mL，用点样仪喷于硝酸纤维素膜上以形成T线和C线，然后置于37℃恒温干燥箱中干燥2～4小时； 

2)所得硝酸纤维素膜浸入含有0.5～5%BSA的PBS缓冲液中，静置20～60min后用含有0.1%～1%Tween-20的PBST缓冲液冲洗三次，然后置于37℃恒温干燥箱中干燥2～4小时，封袋置于4℃保存备用； 

(3)样品垫、结合物释放垫的预处理以及量子点标记物的固化 

1）将样品垫浸入含TritonX-1000.1%～2%的PBS缓冲液中静置20～60min，然后放入37℃恒温干燥箱中干燥2～4小时，封袋置于4℃下保存备用； 

2）结合物释放垫浸入含0.1%～10%的BSA，PEG，TritonX-100，蔗糖的PBS缓冲液中，静置20～60min，然后置于37℃恒温干燥箱中干燥2～4小时，封袋置于4℃保存备用； 

3）将所得量子点与肿瘤标志物抗体复合物用含0.1%～10%的BSA、PEG、TritonX-100、蔗糖的PBS缓冲液稀释5～30倍，涂布在结合物释放垫上，静置5～10min后于37℃恒温干燥箱中干燥干燥2～4小时，封袋置于4℃保存备用。 

（4）组装： 

将所得硝酸纤维素膜固定于单面塑胶板上，所得到的样品垫，结合物释放垫按顺序贴在硝酸纤维素膜上，最后在硝酸纤维素膜的另一端贴上吸水垫，各个垫和膜相互之间重叠1～3mm，试纸条组装完成；用自动切膜机将其进行切割，宽度约为4mm，并装入塑料板中，最后与干燥剂一起装入铝箔袋内密封储存。