[发明专利]一种禽流感疫苗组合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及兽用生物制品，特别是涉及一种禽流感疫苗及其在预防和/或治疗不同亚型禽流感病毒的药物中的应用。

背景技术

禽流感(Avian influenza，AI)是禽流行性感冒的简称，由禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)引起的多种禽类感染的急性呼吸道传染病，也能感染人类，被国际兽医局(OIE)和我国《家畜家禽防疫条例》列为A类烈性传染病。

流感病毒属于正黏病毒科流感病毒属，含有囊膜、为多形态的负链RNA病毒。根据流感病毒内部核蛋白(Nucleoprotein，NP)和基质蛋白(Matrix protein，MP)抗原及其基因特性的不同，可将流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三种类型，其中，能够引起大流行的流感病毒主要是甲型。禽流感病毒即为甲型流感病毒，其基因组共由8个单独的负链RNA片段组成，由片段1至片段8依次为PB1、PB2、PA、HA、NP、NA、M、NS。

根据位于禽流感病毒囊膜上的血凝素HA(Hemagglutinins，由禽流感基因组的第4个片段编码)和神经氨酸酶NA(Neuraminidase，由禽流感基因组的第6个片段编码)抗原性的不同，禽流感病毒可分为若干个亚型，目前已知的HA有16个亚型(H1-H16)、NA有9个亚型(N1-N9)，这两种不同的亚型之间可以进行自由组配，从而形成一个庞大而复杂的禽流感病毒家族。正是由于流感病毒基因组自身的特点决定了其不断发生抗原漂移和抗原转换，从而使得新的流行毒株不断出现。目前，世界上的许多国家和地区都对该病进行过相关报道，常见的且能感染人的高致病性禽流感病毒以H5N1、H7N7、H9N2为代表，以快速爆发和高死亡率为主要临床特征，常常导致饲养的鸡群全部死亡；这一事件也表明家禽是人畜传播潜在的中间宿主。特别地，近期发生的禽流感H7N9疫情，不仅使感染的人类出现高死亡现象，而且带来恶性的连锁反应，使家禽业这一整个产业都遭遇重大的危机，给人类和家禽的预防、控制流感疫情带来了严峻的挑战。

截止到目前，接种疫苗仍然是预防和控制禽流感病毒大流行的最有效手段。由于禽流感病毒的变异速度远远大于变异株相应疫苗的制备速度，尤其是HA和NA抗原性的变异频率较高，而且不同亚型之间几乎上不产生交叉免疫保护。如果禽流感疫苗的生产随着病毒的变异而不断更新，那么针对流感病毒流行株相应疫苗的生产周期较长、生产成本较高，造成人力、物力的浪费，还可能达不到预想的防控效果。因而，制备通用流感疫苗已博得世界各国科学家和疫苗生产公司的青睐，所谓的通用流感疫苗是指一种能够预防所有流感病毒毒株，并可诱导持久性保护性免疫的流感疫苗。

由禽流感病毒基因组第7片段编码的M蛋白(Matrix proteins)为基质蛋白，其基因含有两个开放的阅读框(ORF)，可转录出两个RNA分子，分别翻译出两种基质蛋白M1和M2。其中，基质蛋白M2是禽流感病毒蛋白中除HA、NA外的第三种跨膜蛋白，由三个区域(即N端24个氨基酸残基组成的胞外域、19个氨基酸组成的跨膜区、54个氨基酸残基组成的胞浆尾)组成，不含糖基，具有高度保守性。特别地，M2胞外部分的N端24氨基酸肽段(即M2e)在所测得的禽流感和人流感病毒中，其基因序列几乎完全相同。这表明以M2蛋白作为抗原的主要成分，可对不同亚型的禽流感病毒产生保护性免疫，是研究交叉保护性流感疫苗的理想候选抗原。另外，现有的研究结果还表明：M2蛋白的功能主要包括两点，(1)在流感病毒表面血凝素糖蛋白的合成过程中，M2蛋白作为质子通道控制高尔基体跨膜转移通道的pH值，从而导致HA的结构发生改变；(2)在病毒脱壳时，M2蛋白可酸化病毒粒子形成病毒包涵体颗粒的内部环境，引起细胞质内的HA和M1、M1和RNPs之间或者RNPs蛋白自身解聚。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一种新型的禽流感疫苗，该疫苗既能对不同亚型禽流感病毒产生交叉保护性免疫，又能在减少免疫剂量的条件下达到明显的免疫效果，还能延长疫苗的免疫保护时间。

本发明的主要目的在于提供一种禽流感疫苗组合物，所述的禽流感疫苗组合物包括脂质体、免疫量的M2和/或3M2e蛋白；所述M2蛋白的序列为SEQ ID NO.2，所述3M2e蛋白的序列为SEQ ID NO.4。

本发明所述的M2蛋白基因的核苷酸序列可以为SEQ ID NO.1。

本发明所述的3M2e蛋白基因的核苷酸序列可以为SEQ ID NO.3，其中，所述的3M2e是指将M2蛋白膜外部分N端的24个氨基酸肽段M2e串联成三拷贝的形式。